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小鼠子宫平滑肌细胞

小鼠子宫平滑肌细胞

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产品概述 product description

小鼠子宫平滑肌细胞分离自子宫组织;子宫是孕育胎儿的器官,位于盆腔中部,膀胱与直肠之间,其位置可随膀胱与直肠的充盈程度或体位而有变化。子宫的正常位置主要依靠子宫诸韧带、盆膈、尿生殖膈及会阴中心腱等结构维持,这些结构受损或松弛时,可以引起子宫脱垂。子宫肌层比较厚,由成束或成片的平滑肌组成,肌束间以结缔组织分隔。子宫平滑肌具有收缩功能,收缩受激素的调节,其收缩活动有助于精子向输卵管运送、经血排出以及胎儿娩出。子宫平滑肌层含有大量的血管,如果平滑肌层细胞过度生长,势必造成血管壁的增厚,管腔堵塞,体外培养平滑肌细胞有利于研究子宫和其他富含血管器官的血管形成机制。子宫平滑肌细胞原代分离培养3天后,可见细胞贴壁伸展,细胞形态大小不一,呈梭形、不规则形、三角形或扇形,核卵圆形、居中;2周后细胞汇合,多数细胞伸展呈长梭形,胞浆丰富,有分枝状突起,细胞平行排列成单层或部分区域多层重叠生长,高低起伏;细胞密度低时,常交织成网状;密度高时,则排列为旋涡状或栅栏状。传代后细胞生长较快,4-6天即可汇合,并保持上述形态学特征和生长特点。子宫平滑肌细胞的主要功能:①子宫平滑肌能保持子宫的基本形态,在孕期能最大化的扩张子宫容积,保证胎儿孕育环境;②平滑肌细胞有收缩舒张能力,在生产时能形成生理性的缩腹环,推动胎儿向下移动,辅助生产。

产品属性

产品名称 小鼠子宫平滑肌细胞

简称 USMCs

组织来源 子宫组织

默认种属 昆明小鼠,其他咨询

产品规格 5×10^5Cells/T25
培养基:  小鼠子宫平滑肌细胞完全培养基(含FBS、生长添加剂、Penicillin、Streptomycin等)

换液频率: 每2-3天换液一次

生长特性: 贴壁

细胞形态: 成纤维细胞样

传代比例: 1:2

传代特性: 可传3代左右

消化液: 0.25%胰蛋白酶

小鼠子宫平滑肌细胞体外培养周期有限;建议使用配套的专用生长培养基及正确的操作方法来培养,以此保证该细胞的最佳培养状态。

质量检测

实验室分离的小鼠子宫平滑肌细胞经α-SMA免疫荧光鉴定,纯度可达90%以上,且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。

方法简介

实验室分离的小鼠子宫平滑肌细胞采用胰蛋白酶-胶原酶联合消化法结合组织贴块法制备而来,细胞总量约为5×10⁵ cells/瓶。

操作步骤

复苏前期试剂耗材准备:37℃水浴预热子宫平滑肌细胞完全培养基,准备无菌离心管、T25 培养瓶、PBS 缓冲液、胰酶‑EDTA 消化液,超净台紫外消毒 30min,核对冻存细胞标签,检查试剂无沉淀变质,确认细胞培养箱运行正常。

冻存细胞水浴快速解冻:从液氮罐取出冻存管,快速置于 37℃水浴,轻柔晃动冻存管,1‑2min 融化冻存液,留有微量冰晶,75% 酒精擦拭管外壁,移入超净台,缩短室温暴露时间,减少细胞损伤。

稀释离心去除冻存保护剂:将细胞悬液缓慢滴加到装有预温完全培养基的 15mL 离心管,轻柔混匀,900r/min 离心 5min,离心结束,小心弃去上清液,去除 DMSO 冻存保护剂,不要扰动底部细胞沉淀。

重悬制备单细胞悬液接种:加入子宫平滑肌细胞完全培养基,轻柔吹打沉淀,制备均匀单细胞悬液,细胞计数后按照推荐密度接种 T25 培养瓶,十字摇匀培养瓶,细胞均匀平铺瓶底。

培养箱恒温静置孵育:放入 37℃、5% CO₂饱和湿度培养箱孵育,24h 内不移动培养瓶,给平滑肌细胞充足时间完成贴壁伸展。

换液、细胞状态监控:复苏 24h 后更换预热新鲜完全培养基,吸弃旧培养基去除悬浮死细胞;每 2‑3 天换液,显微镜观察长梭形平滑肌细胞典型形态,排查细菌真菌污染。

传代消化收获细胞:细胞汇合 70‑80% 开展传代,弃培养基,PBS 清洗细胞,胰酶消化,镜下细胞皱缩变圆,立刻完全培养基终止消化,收集细胞离心重悬分瓶扩增;避免细胞 100% 长满,防止细胞表型发生转变。