小鼠子宫内膜上皮细胞分离自子宫组织;子宫是孕育胎儿的器官,位于盆腔中部,膀胱与直肠之间,其位置可随膀胱与直肠的充盈程度或体位而有变化。子宫的正常位置主要依靠子宫诸韧带、盆膈、尿生殖膈及会阴中心腱等结构维持,这些结构受损或松弛时,可以引起子宫脱垂。子宫内膜即黏膜,由上皮(属单层柱状上皮,有分泌细胞和纤毛细胞二种)和固有膜(由结缔组织构成,其内有大量的星形细胞,称为基质细胞)组成,子宫内膜可分为浅表的功能膜和深部的基底层,功能层较厚,约占内膜厚度的4/5;基底层较薄较致密,约占1/5,功能层可剥脱,而基底层不可剥脱。子宫内膜上皮细胞主要功能:①子宫内膜亦称子宫黏膜,是指构成哺乳类子宫内壁的一层;②子宫内膜对动情素和孕激素都起反应,因此可随着性周期(发情周期、月经周期)发生显著的变化。子宫内膜与胚胎附植密切相关,在生殖生理的研究中占重要地位。在胚胎与母体“对话”的过程中,子宫内膜上皮细胞充当了极其重要的角色。子宫内膜构成雌性哺乳动物子宫壁的最内层,位于子宫腔面,在动物生殖生理活动中占有重要地位。子宫和子宫内膜是维持雌性动物生理功能和生育能力的重要器官,子宫内膜的再生修复是子宫的重要生理功能。体外培养的子宫内膜上皮细胞对于研究其生理功能、药物作用以及各种致病因素作用下的病理生理改变具重要意义。
产品属性
产品名称 小鼠子宫内膜上皮细胞
组织来源 子宫组织
默认种属 昆明小鼠,其他咨询
产品规格 5×10^5Cells/T25
包被条件: 鼠尾胶原Ⅰ(2-5 μg/cm²)
培养基: 小鼠子宫内膜上皮细胞完全培养基(含FBS、生长添加剂、Penicillin、Streptomycin等)
换液频率: 每2-3天换液一次
生长特性: 贴壁
细胞形态: 上皮细胞样
传代比例: 1:2
传代特性: 可传1-2代
消化液: 0.25%胰蛋白酶
小鼠子宫内膜上皮细胞体外培养周期有限;建议使用配套的专用生长培养基及正确的操作方法来培养,以此保证该细胞的最佳培养状态。
质量检测
实验室分离的小鼠子宫内膜上皮细胞经Cytokeratin-19免疫荧光鉴定,纯度可达90%以上,且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。
方法简介
实验室分离的小鼠子宫内膜上皮细胞采用胶原酶消化法,结合上皮细胞专用培养基培养筛选制备而来,细胞总量约为5×10⁵ cells/瓶。
操作步骤
复苏实验前期筹备:37℃水浴预热子宫内膜上皮细胞专用完全培养基,准备无菌离心管、培养瓶、PBS 缓冲液、低浓度胰酶消化液,超净台紫外灭菌,核对冻存管标签;该细胞较为娇嫩,仔细检查试剂无浑浊、微生物污染,确认培养箱参数稳定。
冻存细胞水浴解冻处理:取出液氮冻存管,快速放入 37℃水浴,轻晃冻存管加速融化,1‑2min 完成解冻,仅残留微小冰晶,取出冻存管,75% 酒精擦拭外壁,移入超净工作台,减少细胞室温暴露带来的损伤。
稀释离心去除 DMSO 保护剂:将细胞悬液缓慢滴入装有预温完全培养基的 15mL 离心管,轻柔吹打混匀,850r/min 离心 6min,离心结束,小心弃去上层上清液,充分去除冻存保护剂,保护底部细胞沉淀不被吸走。
温和重悬制备单细胞悬液接种:加入子宫内膜上皮细胞完全培养基,温和轻柔吹打细胞沉淀,避免暴力吹打破坏细胞,制备均匀单细胞悬液,计数后按标准密度接种 T25 培养瓶,十字摇晃培养瓶,使细胞均匀铺在瓶底。
培养箱静置孵育贴壁:放置 37℃、5% CO₂饱和湿度培养箱静置孵育,48h 内尽量不挪动培养瓶,子宫内膜上皮细胞贴壁速度较慢,稳定环境利于细胞贴壁伸展。
换液操作和细胞形态观察:复苏 48h 后开展首次换液,吸除旧培养基,PBS 轻洗一遍,加入预热新鲜培养基,去除悬浮死亡细胞;每 2‑3 天更换培养基,显微镜观察多边形上皮细胞形态,警惕成纤维细胞混杂,监控污染。
传代消化收集细胞:细胞汇合 70‑80% 进行传代,弃旧培养基,PBS 洗涤瓶壁细胞,加入低浓度胰酶温和消化,镜下细胞收缩变圆,加入完全培养基终止消化,收集细胞悬液离心,重悬分瓶扩增;该细胞传代能力有限,尽量选用低代细胞用于实验。
