小鼠椎间盘纤维环细胞分离自椎间盘组织；椎间盘是位于脊柱两椎体之间，由软骨板、纤维环、髓核组成的一个密封体。上下有软骨板，是透明软骨复盖于椎体上，下面骺环中间的骨面。上下的软骨板与纤维环一起将髓核密封起来。纤维环由胶原纤维束的纤维软骨构成，位于髓核的四周。纤维环的纤维束相互斜行交叉重叠，使纤维环成为坚实的组织，能承受较大的弯曲和扭转负荷。纤维环的前侧及两侧较厚，而后侧较薄。纤维环的前部有强大的前纵韧带，后侧的后纵韧带较窄、较薄。纤维环细胞密度为9000个细胞/mm³，其外层的细胞呈梭型，主要属于纤维细胞，内层细胞呈圆形，主要属于软骨细胞。在培养的情况下，用透射电镜观察则有许多共同的超微结构表现，它们的核较圆，核仁较明显。细胞质内可见大量的附有核糖体颗粒的粗面内质网和滑面内质网。细胞质内线粒体多，为椭圆形，有的可看到双层单位膜，由单位膜包绕初级深酶体和次级深酶体。细胞质内有一系列的扁平囊及小泡主成的高尔基复合体和分泌颗粒，纤维环细胞合成分泌蛋白多糖及胶原纤维的能力很旺盛，保证纤维环生理代谢活动所需的构造物质的供给。一但这种供给减少，纤维环的生物性能就会减弱，椎间盘开始退变。
产品属性
产品名称 小鼠椎间盘纤维环细胞
组织来源 椎间盘组织
默认种属 昆明小鼠，其他咨询
产品规格 5×10^5Cells/T25
培养基： 小鼠椎间盘纤维环细胞完全培养基(含FBS、生长添加剂、Penicillin、Streptomycin等)
换液频率： 每2-3天换液一次
生长特性： 贴壁
细胞形态： 梭形、多角形
传代比例： 1:2
传代特性： 可传3-5代左右
消化液： 0.25%胰蛋白酶
小鼠椎间盘纤维环细胞体外培养周期有限；建议使用配套的专用生长培养基及正确的操作方法来培养，以此保证该细胞的最佳培养状态。
质量检测
实验室分离的小鼠椎间盘纤维环细胞经Ⅰ型胶原蛋白免疫荧光鉴定，纯度可达90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。
方法简介
实验室分离的小鼠椎间盘纤维环细胞采用胶原酶-中性蛋白酶联合消化法并结合软骨细胞专用培养基培养筛选制备而来，细胞总量约为5×10⁵ cells/瓶。
操作步骤
复苏前期试剂耗材准备：37℃水浴预热纤维环细胞完全培养基，准备无菌离心管、培养瓶、PBS 缓冲液、胰酶消化液，超净台紫外灭菌 30min，核对冻存管标签，检查试剂无浑浊沉淀，确认细胞培养箱参数稳定。
冻存管水浴解冻处理：取出液氮冻存细胞，快速放入 37℃水浴，轻晃冻存管加速融化，1‑2min 完成解冻，仅残留微小冰晶，取出冻存管，75% 酒精擦拭外壁，移入超净工作台，减少细胞室温暴露损伤。
稀释离心去除 DMSO 保护剂：将细胞悬液缓慢滴入装有预温完全培养基的 15mL 离心管，轻柔吹打混匀，850r/min 离心 6min，离心结束，小心弃去上层上清液，充分去除冻存保护剂，保护底部细胞沉淀。
重悬制备单细胞悬液接种：加入纤维环细胞完全培养基，温和吹打细胞沉淀，制备均匀单细胞悬液，细胞计数后按标准密度接种 T25 培养瓶，十字摇晃培养瓶，使细胞均匀铺于瓶底。
培养箱静置孵育贴壁：放置 37℃、5% CO₂饱和湿度培养箱静置孵育，48h 内尽量不挪动培养瓶，纤维环细胞贴壁速度较慢，稳定环境利于细胞贴壁伸展。
换液操作和形态观察：复苏 48h 后开展首次换液，吸除旧培养基，PBS 轻洗，加入预热新鲜培养基，去除悬浮死亡细胞；每 2‑3 天更换培养基，显微镜观察梭形、多边形纤维环细胞形态，监控细胞污染与去分化情况。
传代消化收集细胞：细胞汇合 70‑80% 进行传代，弃旧培养基，PBS 洗涤瓶壁细胞，加入胰酶消化，镜下细胞收缩变圆，加入完全培养基终止消化，收集细胞悬液离心，重悬分瓶扩增；优选低代细胞做实验，高代细胞表型容易发生改变。
