小鼠椎间盘髓核细胞分离椎间盘组织；椎间盘是位于脊柱两椎体之间，分为中央部的髓核，富于弹性的胶状物质；周围部的纤维环，由多层纤维软骨环按同心圆排列。上下有软骨板，是透明软骨复盖于椎体上，下面骺环中间的骨面。上下的软骨板与纤维环一起将髓核密封起来。纤维环由胶原纤维束的纤维软骨构成，位于髓核的四周。纤维环的纤维束相互斜行交叉重叠，使纤维环成为坚实的组织，能承受较大的弯曲和扭转负荷。髓核，是乳白色半透明胶状体，富于弹性，为椎间盘结构的一部分，位于两软骨板与纤维环之间。由纵横交错的纤维网状结构即软骨细胞和蛋白多糖黏液样基质构成的弹性胶冻物质。婴幼儿时期的髓核含水量为80%-90%，即使到了老年，其含水量也在70%上下。髓核在出生时体积大而松散，位于椎间盘的中央，至成年时位置移至椎间盘的中后部；在成年以前构成髓核的主要物质是大量蛋白多糖复合体、胶原纤维和纤维软骨，随着年龄的增长，髓核中的蛋白多糖解聚增多，水分逐渐减少，胶原增粗并逐渐被纤维软骨所替代。
产品属性
产品名称 小鼠椎间盘髓核细胞
简称 NPCs
组织来源 椎间盘组织
默认种属 昆明小鼠，其他咨询
产品规格 5×10^5Cells/T25
培养基： 小鼠椎间盘髓核细胞完全培养基(含FBS、生长添加剂、Penicillin、Streptomycin等)
换液频率： 每3-4天换液一次
生长特性： 贴壁
细胞形态： 梭形、多角形
传代比例： 1:2
传代特性： 可传3-5代左右
消化液： 0.25%胰蛋白酶
小鼠椎间盘髓核细胞体外培养周期有限；建议使用配套的专用生长培养基及正确的操作方法来培养，以此保证该细胞的最佳培养状态。
质量检测
实验室分离的小鼠椎间盘髓核细胞经Ⅱ型胶原蛋白免疫荧光鉴定，纯度可达90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。
方法简介
实验室分离的小鼠椎间盘髓核细胞采用胶原酶-中性蛋白酶混合消化法并结合软骨细胞专用培养基培养筛选制备而来，细胞总量约为5×10⁵ cells/瓶。
操作步骤
复苏实验前期准备：37℃水浴预热髓核细胞专用完全培养基，准备无菌离心管、培养瓶、PBS 缓冲液、低浓度胰酶消化液，超净台紫外消毒，核对冻存细胞标签；髓核细胞增殖能力偏弱，检查全部试剂无微生物污染，确认培养箱运行正常。
冻存细胞水浴快速融化：取出液氮冻存管，投入 37℃水浴轻柔晃动，1‑1.5min 融化冻存液，留存少量冰晶即可，75% 酒精擦拭冻存管外壁，带入超净台，尽量缩短细胞室温暴露时长，降低细胞凋亡。
稀释离心去除冻存保护剂：将细胞悬液缓慢滴加到含有完全培养基的 15mL 离心管，轻柔混匀，900r/min 离心 6min，离心完毕，小心弃除上清，DMSO 对髓核细胞毒性较强，上清尽量去除干净，不触碰底部细胞沉淀。
温和重悬细胞接种铺瓶：加入髓核细胞完全培养基，轻柔低速吹打沉淀，禁止大力吹打损伤脆弱细胞，制备单细胞悬液，计数后按照推荐密度接种 T25 培养瓶，十字摇匀，使细胞均匀分布瓶底。
培养箱静置孵育贴壁：放入 37℃、5% CO₂饱和湿度培养箱静置孵育，48h 内不移动培养瓶，髓核细胞贴壁速度慢，需要充足时间完成贴壁伸展。
换液以及细胞状态监测：复苏 48h 后首次换液，吸弃旧培养基，PBS 轻柔漂洗，加入预热新鲜培养基，去除悬浮死亡细胞；每 2‑3 天换液，显微镜观察多边形髓核细胞形态，警惕细胞去分化，留意污染迹象。
传代消化收获细胞：细胞汇合 70‑75% 进行传代，弃培养基，PBS 清洗，胰酶温和消化，镜下细胞皱缩变圆，立刻完全培养基终止消化，收集细胞离心重悬分瓶；尽量使用低代次髓核细胞，高代细胞容易丢失髓核细胞生理表型。
