小鼠口腔黏膜成纤维细胞分离自口腔黏膜组织；口腔（oral cavity）是消化道的起始部分。前借口裂与外界相通，后经咽峡与咽相续。口腔内有牙、舌等器官。口腔的前壁为唇、侧壁为颊、顶为腭、口腔底为黏膜和肌等结构。口腔借上、下牙弓分为前外侧部的口腔前庭（oral vestibule）和后内侧部的固有口腔（oral cavity proper）；当上、下颌牙咬合时，口腔前庭与固有口腔之间可借第三磨牙后方的间隙相通。成纤维细胞（Fibroblast）是疏松结缔组织的主要细胞成分，由胚胎时期的间充质细胞分化而来。成纤维细胞较大，轮廓清楚，多为突起的纺锤形或星形的扁平状结构，其细胞核呈规则的卵圆形，核仁大而明显。成纤维细胞功能活动旺盛，细胞质嗜弱碱性，具明显的蛋白质合成和分泌活动，在一定条件下，它可以实现跟纤维细胞的互相转化；成纤维细胞对不同程度的细胞变性、坏死和组织缺损的修复有着十分重要的作用。刚分离的表皮成纤维细胞呈圆形、折光性良好，悬浮于培养基中。30 min细胞贴壁，其中部分开始伸出伪足，表现为小的突起；6 h后细胞基本贴壁完全，伸展成梭形，胞核清晰，分布较均匀，散在生长，不聚集成团；细胞生长迅速，5-7天即呈融合状态，细胞排列紧密，有的交叉重叠生长，平坦、胞体较大，细胞质透明，细胞核较大，呈椭圆形，颜色淡。细胞融合，并彼此连接成网状；细胞呈突起的纺锤形或星形的扁平分布。
产品属性
产品名称 小鼠口腔黏膜成纤维细胞
组织来源 口腔黏膜组织
默认种属 昆明小鼠，其他咨询
产品规格 5×10^5Cells/T25
培养基： 小鼠口腔黏膜成纤维细胞完全培养基(含FBS、生长添加剂、Penicillin、Streptomycin等)
换液频率： 每2-3天换液一次
生长特性： 贴壁
细胞形态： 成纤维细胞样
传代比例： 1:2
传代特性： 可传1-2代
消化液： 0.25%胰蛋白酶
小鼠口腔黏膜成纤维细胞体外培养周期有限；建议使用配套的专用生长培养基及正确的操作方法来培养，以此保证该细胞的最佳培养状态。
质量检测
实验室分离的小鼠口腔黏膜成纤维细胞经Vimentin免疫荧光鉴定，纯度可达90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。
方法简介
实验室分离的小鼠口腔黏膜成纤维细胞采用胰蛋白酶-胶原酶混合酶消化后差速贴壁制备而来，细胞总量约为5×10⁵ cells/瓶。
操作步骤
口腔黏膜组织取材：小鼠消毒处死后，无菌条件下撑开口腔，剪下颊部、口唇内侧口腔黏膜组织；置于预冷无菌 PBS 中，精细剔除黏膜下层肌肉、脂肪、腺体组织，PBS 反复冲洗组织表面血液、口腔分泌物。
组织剪切与上皮去除预处理：将黏膜组织剪切成小块，DispaseⅡ 酶 4℃孵育过夜，分离黏膜上皮层与下层结缔组织；次日撕除上皮层，只保留黏膜下层结缔组织，PBS 充分漂洗结缔组织碎块。
胶原酶消化解离组织：把结缔组织剪碎至 1 mm³ 碎块，加入 Ⅰ 型胶原酶消化液，37℃水浴摇床消化 60‑90 min，间隔 15 min 吹打混匀；组织充分松散后，加入成纤维细胞完全培养基终止消化。
过滤离心收集细胞沉淀：消化悬液过 200 目无菌筛网除去组织残渣；收集滤液，1000 r/min 离心 6 min，弃去上清废液，得到口腔黏膜成纤维细胞沉淀。
重悬计数、细胞接种铺板：成纤维细胞完全培养基轻柔重悬细胞沉淀，打散细胞团；活细胞计数，调整细胞浓度接种至无菌培养瓶，放入 37℃、5% CO₂饱和湿度培养箱孵育。
细胞培养换液以及传代：接种 24 h 全量换液去除死细胞，之后每 2‑3 d 更换培养基；当细胞汇合度 80‑90%，PBS 清洗，胰酶消化，吹打制备单细胞悬液进行分瓶传代；控制传代代数，延缓细胞衰老。
细胞鉴定和冻存储备：Vimentin 成纤维细胞标志物免疫荧光鉴定；选取对数生长期无污染细胞配置冻存液，程序降温盒梯度降温，液氮长期冻存；复苏快速水浴融化，离心去除冻存液再接种培养。
