小鼠精原干细胞分离自睾丸组织；睾丸是雄性生殖器官，也叫精巢，具体结构包括生精小管以及周围的结缔组织。生精小管也叫曲精小管、曲细精管，是睾丸上细长而弯曲的管道。精原干细胞是位于睾丸生精小管的生精上皮内的一群生精干细胞，是成体内的定向干细胞。精原干细胞的一些独特优势使其成为动物转基因的理想宿主细胞。精原干细胞的生理生化特性及其分裂增殖、分化等多项生命活动的调节机制的深入研究，精子发生机理的进一步阐明以及精原干细胞转染，异体、异种移植技术的实际应用，都迫切需要找到一种可行的方法将其分离纯化，以期得到较高产量和纯度的有活力的精原细胞用于体外培养。在哺乳动睾丸内，精子发生时一个受高度调控和持续的过程，精原干细胞（SSCs）一方面进行自我更新维持干细胞数量，另一方面又不断执行分化成各级生精细胞直至最后生成精子。精原干细胞定居在曲精细管上皮的基膜处，是哺乳动物精子发生的最原始细胞，也是动物体内一起能将遗传信息传递的干细胞。精原干细胞体外培养体系的建立，在生物学、医学、畜牧业生产及制备转基因动物等领域具有广阔的应用前景。精原干细胞（SSCs）是生精上皮近基底膜的一群细胞，具有自我更新能力和多向分化潜能，是哺乳动物体内唯一能将遗传信息传递给下一代的成体干细胞。
产品属性
产品名称 小鼠精原干细胞
简称 SSCs
组织来源 睾丸组织
默认种属 昆明小鼠，其他咨询
产品规格 5×10^5cells/T25
培养基： 小鼠精原干细胞完全培养基(含FBS、生长添加剂、Penicillin、Streptomycin等)
换液频率： 每2-3天换液一次
生长特性： 贴壁
细胞形态： 梭形、圆形
传代比例： 1:2
传代特性： 可传1-2代
消化液： 0.25%胰蛋白酶
小鼠精原干细胞体外培养周期有限；建议使用配套的专用生长培养基及正确的操作方法来培养，以此保证该细胞的最佳培养状态。
质量检测
实验室分离的小鼠精原干细胞经c-kit免疫荧光鉴定，纯度可达90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。
方法简介
实验室分离的小鼠精原干细胞采用先机械吹打、后胰蛋白酶消化，结合Percoll密度梯度离心法制备而来，细胞总量约为5×10⁵ cells/瓶。
操作步骤
睾丸组织取材预处理：选取出生 6‑8 d 雄性小鼠，75% 乙醇消毒处死，无菌解剖取出双侧睾丸组织，置于预冷无菌 PBS；小心剥离睾丸外层白膜，剔除附睾、血管、脂肪结缔组织，收集睾丸曲细精管组织，PBS 多次冲洗。
曲细精管分散与预消化：把剥离白膜后的睾丸组织打散散开曲细精管，PBS 洗涤；加入胶原酶 Ⅳ 消化液，37℃水浴孵育 15‑20 min，消解睾丸间质组织，消化后 PBS 洗涤，沉降收集曲细精管小管。
胰酶消化解离生殖细胞：吸除洗涤液，加入 0.25% 胰蛋白酶‑EDTA 消化液，37℃水浴孵育 10‑15 min，间断轻柔吹打，使曲细精管内部细胞充分解离，加入含血清干细胞完全培养基终止酶消化。
过滤离心获取细胞粗悬液：细胞混合悬液依次过 100 目、400 目无菌细胞筛，滤除组织残渣；滤液 1200 r/min 离心 7 min，弃上清，获得睾丸来源细胞混合沉淀。
差速贴壁纯化精原干细胞与接种：干细胞完全培养基重悬沉淀；差速贴壁去除睾丸间质细胞、支持细胞杂细胞，将细胞悬液接种至未包被培养皿孵育 2‑3 h，支持细胞贴壁，收集未贴壁精原干细胞悬液；计数后接种于层粘连蛋白包被的培养器皿。
干细胞培养、换液维持干性：37℃、5% CO₂培养箱培养，采用精原干细胞专用培养基；每 2 d 半量更换新鲜干细胞培养基，观察精原干细胞形成簇状克隆，严格把控培养条件，防止干细胞分化。
干细胞鉴定与冻存保藏：使用 PLZF、Oct‑4 精原干细胞特异性标志物免疫荧光鉴定细胞；收集状态良好未分化的干细胞，配置干细胞专用冻存液，缓慢梯度降温后液氮长期保存；复苏操作轻柔，减少干细胞损伤。
