小鼠结肠平滑肌细胞分离自结肠组织；结肠在右髂窝内续于盲肠，在第3骶椎平面连接直肠。结肠分升结肠、横结肠、降结肠和乙状结肠4部分，大部分固定于腹后壁，结肠的排列酷似英文字母“M”，将小肠包围在内。结肠横切面由内到外依次为：黏膜（上皮层、固有层、黏膜肌层），黏膜下层（疏松结缔组织），肌层（内环形、外纵行两层平滑肌），外膜（纤维膜或浆膜）。结肠平滑肌细胞主要分布于黏膜肌层和肌层的内环形、外纵行平滑肌；结肠运动少而缓慢，对刺激的反应也较迟缓。结肠平滑肌在食物消化与吸收、肠道运动和物质分泌、诱发全身炎症反应以及细胞内信号转导途径等研究中起着重要的作用。结肠平滑肌细胞原代分离培养3天后，可见细胞贴壁伸展，细胞形态大小不一，呈梭形、不规则形、三角形或扇形，核卵圆形、居中；2周后细胞汇合，多数细胞伸展呈长梭形，胞浆丰富，有分枝状突起，细胞平行排列成单层或部分区域多层重叠生长，高低起伏；细胞密度低时，常交织成网状；密度高时，则排列为旋涡状或栅栏状。传代后细胞生长较快，4-6天即可汇合，并保持上述形态学特征和生长特点。结肠平滑肌运动活性受到神经递质、胃肠激素和药物等因素的调节。随着现代胃肠动力学研究的进展，对胃肠运动的研究已从器官、组织水平发展到细胞、分子水平，要求在胃肠道单个平滑肌细胞标本上来完成各种电生理、药理和分子生物学等实验。体外培养细胞，由于影响因素单一，是研究细胞功能以及相应的细胞信号转导机制的基础。
产品属性
产品名称 小鼠结肠平滑肌细胞
简称 CSMCs
组织来源 结肠组织
默认种属 昆明小鼠，其他咨询
产品规格 5×10^5Cells/T25
培养基： 小鼠结肠平滑肌细胞完全培养基(含FBS、生长添加剂、Penicillin、Streptomycin等)
换液频率： 每2-3天换液一次
生长特性： 贴壁
细胞形态： 成纤维细胞样
传代比例： 1:2
传代特性： 可传3代左右
消化液： 0.25%胰蛋白酶
小鼠结肠平滑肌细胞体外培养周期有限；建议使用配套的专用生长培养基及正确的操作方法来培养，以此保证该细胞的最佳培养状态。
质量检测
实验室分离的小鼠结肠平滑肌细胞经α-SMA免疫荧光鉴定，纯度可达90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。
方法简介
实验室分离的小鼠结肠平滑肌细胞采用胰蛋白酶-胶原酶联合消化法结合差速贴壁法制备而来，细胞总量约为5×10⁵ cells/瓶。
操作步骤
结肠组织取材分离：处死小鼠，无菌解剖取出结肠肠管，预冷 PBS 冲洗肠腔粪便；纵向剪开肠管，展平组织，使用显微镊子和棉签刮除表层结肠黏膜上皮，保留下层平滑肌组织，剔除外围脂肪、肠系膜结缔组织，预冷 PBS 反复冲洗组织。
组织剪碎预处理：将剥离干净的结肠平滑肌组织转移无菌培养皿，眼科剪充分剪切组织至 1 mm³ 大小碎块，PBS 洗涤组织碎块 2 次，吸净洗涤废液。
复合酶消化解离组织：加入 Ⅱ 型胶原酶 + 弹性蛋白酶混合消化液，完全浸没组织碎块；37℃水浴摇床 90 r/min 消化 60‑90 min，每 20 min 轻柔吹打，组织松散后，加入含血清平滑肌细胞完全培养基终止酶消化。
过滤除残渣，离心收集细胞：消化混合悬液过 200 目无菌细胞筛，除去未消化的组织纤维块；收集滤液，1000 r/min 离心 6‑7 min，弃上清废液，得到平滑肌细胞沉淀。
重悬计数、接种铺板：平滑肌细胞完全培养基轻柔重悬细胞沉淀，打散细胞团，台盼蓝染色活细胞计数；调整合适细胞浓度接种至无菌培养瓶，放入 37℃、5% CO₂细胞培养箱。
培养换液与传代扩增：接种 24 h 后全量换液去除悬浮死细胞，后续每 2‑3 d 更换新鲜培养基；细胞汇合至 85‑90%，PBS 清洗，胰酶消化，吹打制成单细胞悬液分瓶传代；控制传代次数，避免细胞表型发生改变。
细胞鉴定和冻存保存：α‑SMA 平滑肌肌动蛋白标志物免疫荧光鉴定细胞纯度；选取对数生长期无污染细胞配置冻存液，程序降温盒梯度降温后置于液氮长期冻存；复苏快速融化，离心去除冻存保护剂再接种。
