小鼠结肠黏膜上皮细胞分离自结肠组织；结肠在右髂窝内续于盲肠，在第3骶椎平面连接直肠。结肠分升结肠、横结肠、降结肠和乙状结肠4部分，大部分固定于腹后壁，结肠的排列酷似英文字母“M”，将小肠包围在内。结肠横切面由内到外依次为：黏膜（上皮层、固有层、黏膜肌层），黏膜下层（疏松结缔组织），肌层（内环形、外纵行两层平滑肌），外膜（纤维膜或浆膜）。肠黏膜上皮细胞是机体内外环境的重要屏障，持续暴露于大量抗原中，也是机体面对病原微生物的第一道防线。因此，肠黏膜上皮细胞除有吸收、分泌和转运等重要生理功能之外，在黏膜先天性和获得性免疫防御机制中也起着重要作用。肠黏膜上皮细胞作为首先接触抗原的细胞，在黏膜免疫反应的起始阶段发挥关键作用，它决定黏膜免疫反应的发生、性质和强度。探讨正常结肠黏膜上皮细胞的分离、体外培养方法，为研究肠黏膜上皮细胞以及与肠黏膜相关疾病建立合适的细胞模型。
产品属性
产品名称 小鼠结肠黏膜上皮细胞
组织来源 结肠组织
默认种属 昆明小鼠，其他咨询
产品规格 5×10^5Cells/T25
包被条件： 鼠尾胶原Ⅰ（2-5 μg/cm²）
培养基： 小鼠结肠黏膜上皮细胞完全培养基(含FBS、生长添加剂、Penicillin、Streptomycin等)
换液频率： 每2-3天换液一次
生长特性： 贴壁
细胞形态： 上皮细胞样
传代比例： 1:2
传代特性： 可传1-2代
消化液： 0.25%胰蛋白酶
小鼠结肠黏膜上皮细胞体外培养周期有限；建议使用配套的专用生长培养基及正确的操作方法来培养，以此保证该细胞的最佳培养状态。
质量检测
实验室分离的小鼠结肠黏膜上皮细胞经Cytokeratin-18免疫荧光鉴定，纯度可达90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。
方法简介
实验室分离的小鼠结肠黏膜上皮细胞采用先机械分离法、后胶原酶消化法并通过上皮细胞专用培养基培养筛选制备而来，细胞总量约为5×10⁵ cells/瓶。
操作步骤
结肠组织解剖取材处理：颈椎脱臼处死小鼠，75% 乙醇消毒腹部，剪开腹腔，分离结肠肠段，避开盲肠、直肠交界；完整取出结肠组织，置于预冷无菌 PBS 中，剔除肠系膜、脂肪以及血管结缔组织。
肠管冲洗与黏膜剥离：使用预冷 PBS 反复冲洗结肠肠腔内部，彻底清除粪便内容物；纵向剪开结肠肠管，展平肠组织，显微器械轻柔刮取结肠黏膜层，尽量不要刮取下层平滑肌组织，收集黏膜组织碎块，PBS 多次漂洗。
螯合预处理联合酶消化：黏膜组织碎块先使用预冷 EDTA‑PBS 溶液 4℃孵育 20‑30 min，解离细胞间紧密连接；吸除 EDTA 溶液，加入胶原酶 Ⅴ 消化液，37℃水浴消化 30‑50 min，间断轻柔吹打，之后加入上皮细胞完全培养基终止消化。
过滤离心富集细胞：消化混合悬液过 200 目、400 目双层无菌筛网，滤除组织残渣；滤液 1200 r/min 离心 7 min，小心弃上清，得到结肠黏膜上皮细胞沉淀。
重悬纯化，细胞接种：专用结肠上皮完全培养基重悬细胞沉淀；利用差速贴壁去除成纤维细胞杂细胞，短暂预贴壁，收集未贴壁上皮细胞，活细胞计数，接种至提前包被胶原的培养瓶板。
细胞培养与换液管控：37℃、5% CO₂培养箱孵育，接种 18‑24 h 后全量更换培养基，清除漂浮死细胞、肠腺碎片；之后每 2‑3 d 半量换液；观察上皮样细胞克隆，警惕平滑肌、成纤维细胞杂细胞增殖污染。
细胞鉴定、冻存储备：CK‑18、E‑cadherin 上皮标志物免疫荧光鉴定；原代结肠上皮增殖能力有限，少传代；状态优良细胞配置冻存液梯度降温，液氮罐长期保存，复苏后尽快用于实验。
