小鼠角膜成纤维细胞分离自眼角膜组织；角膜位于眼球前壁的一层透明膜，约占纤维膜的前1/6，从后面看角膜呈正圆形，从前面看为横椭圆形。角膜厚度各部分不尽相同，中央部最薄。角膜有十分敏感的神经末梢，如有外物接触角膜，眼睑便会不由自主地合上以保护眼睛。为了保持透明，角膜并没有血管，透过外界空气、泪液及房水获取养份及氧气。角膜分为五层，由前向后依次为：上皮细胞层、前弹力层、基质层、后弹力层、内皮细胞层。成纤维细胞（Fibroblast）是疏松结缔组织的主要细胞成分，由胚胎时期的间充质细胞分化而来。成纤维细胞较大，轮廓清楚，多为突起的纺锤形或星形的扁平状结构，其细胞核呈规则的卵圆形，核仁大而明显。成纤维细胞功能活动旺盛，细胞质嗜弱碱性，具明显的蛋白质合成和分泌活动，在一定条件下，它可以实现跟纤维细胞的互相转化；成纤维细胞对不同程度的细胞变性、坏死和组织缺损的修复有着十分重要的作用。刚分离的角膜成纤维细胞呈圆形、折光性良好，悬浮于培养基中。30 min细胞贴壁，其中部分开始伸出伪足，表现为小的突起；6 h后细胞基本贴壁完全，伸展成梭形，胞核清晰，分布较均匀，散在生长，不聚集成团；细胞生长迅速，5-7天即呈融合状态，细胞排列紧密，有的交叉重叠生长，平坦、胞体较大，细胞质透明，细胞核较大，呈椭圆形，颜色淡。细胞融合，并彼此连接成网状；细胞呈突起的纺锤形或星形的扁平分布。角膜成纤维细胞在生理条件下的主要功能包括：构造和维持角膜的正常形态，合成和释放细胞外基质以及组织损伤后及时大量聚集修复损伤组织。
产品属性
产品名称 小鼠角膜成纤维细胞
组织来源 眼角膜组织
默认种属 昆明小鼠，其他咨询
产品规格 5×10^5Cells/T25
培养基： 小鼠角膜成纤维细胞完全培养基(含FBS、生长添加剂、Penicillin、Streptomycin等)
换液频率： 每2-3天换液一次
生长特性： 贴壁
细胞形态： 成纤维细胞样
传代比例： 1:2
传代特性： 可传3代左右
消化液： 0.25%胰蛋白酶
小鼠角膜成纤维细胞体外培养周期有限；建议使用配套的专用生长培养基及正确的操作方法来培养，以此保证该细胞的最佳培养状态。
质量检测
实验室分离的小鼠角膜成纤维细胞经Vimentin免疫荧光鉴定，纯度可达90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。
方法简介
实验室分离的小鼠角膜成纤维细胞采用胰蛋白酶-胶原酶混合消化法结合差速贴壁法制备而来，细胞总量约为5×10⁵ cells/瓶。
操作步骤
角膜组织分离取材：选取 6‑8 周龄 SPF 小鼠，消毒处死，摘取完整眼球，置于预冷无菌 PBS 之中；体视显微镜下操作，沿角膜缘剪开眼球组织，完整分离角膜组织，仔细剪除虹膜、晶状体、视网膜等附属组织，PBS 反复冲洗角膜组织，去除眼内残余色素与血液。
组织处理与酶消化准备：将清洗干净的角膜组织转移无菌培养皿，精细剔除角膜上皮层、角膜内皮层组织，仅保留角膜基质组织；眼科剪将基质组织剪碎至约 1 mm³ 组织碎块，PBS 洗涤两次，吸净洗涤废液。
胶原酶消化解离组织块：加入 Ⅰ 型胶原酶消化液完全浸没组织碎块，37℃水浴消化 60‑90 min，间隔 15 min 吹打混匀，待组织松散解离，加入含血清成纤维细胞完全培养基终止消化反应。
过滤、离心获得细胞沉淀：消化后的细胞混合液过 200 目无菌细胞筛，除去未消化的组织碎片；收集滤液，1000 r/min 离心 6 min，弃上清，得到角膜成纤维细胞粗沉淀。
重悬纯化以及细胞接种：加入成纤维细胞完全培养基轻柔重悬细胞沉淀，充分打散细胞团块；进行活细胞计数，调整细胞悬液浓度，接种至无菌细胞培养瓶，放置培养箱孵育。
细胞传代培养与定期换液：37℃、5% CO₂条件培养，24 h 后更换培养基去除死细胞，每 2‑3 d 更换新鲜培养基；当细胞汇合度达到 80‑90%，PBS 清洗，胰酶消化，制成单细胞悬液分瓶传代，控制传代次数，防止细胞衰老。
细胞鉴定、冻存储备：使用 Vimentin 成纤维细胞标志物做免疫荧光鉴定；选取对数生长期状态优良细胞，配置冻存液，程序降温盒梯度降温，存放于液氮罐；复苏的时候快速水浴融化，离心去除冻存溶剂后接种培养。
