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小鼠甲状腺滤泡上皮细胞

小鼠甲状腺滤泡上皮细胞

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产品概述 product description

小鼠甲状腺滤泡上皮细胞分离自甲状腺组织;甲状腺是脊椎动物非常重要的腺体,属于内分泌器官。在哺乳动物身体中,它位于颈部甲状软骨下方,气管两旁。甲状腺表面有结缔组织被膜,表面结缔组织深入到腺实质,将实质分为许多不明显的小叶,小叶内有很多甲状腺滤泡和滤泡旁细胞。甲状腺控制使用能量的速度、制造蛋白质、调节机体对其他贺尔蒙的敏感性。甲状腺依靠制造甲状腺素来调整这些反应,有T3和T4。这两者调控代谢、生长速率还有调解其他的身体系统。T3和T4由碘和酪胺酸合成。甲状腺也生产降钙素,调节体内钙的平衡。其中,甲状腺滤泡上皮细胞(也称为滤泡细胞或主要细胞)是在甲状腺细胞是负责生产和分泌甲状腺激素,甲状腺素(T4)和三碘甲状腺原氨酸(T3)。

产品属性

产品名称 小鼠甲状腺滤泡上皮细胞

组织来源 甲状腺组织

默认种属 昆明小鼠,其他咨询

产品规格 5×10^5Cells/T25
包被条件: 鼠尾胶原Ⅰ(2-5 μg/cm²)

培养基: 小鼠甲状腺滤泡上皮细胞完全培养基(含FBS、生长添加剂、Penicillin、Streptomycin等)

换液频率: 每2-3天换液一次

生长特性: 贴壁

细胞形态: 上皮细胞样

传代比例: 1:2

传代特性: 可传1-2代

消化液: 0.25%胰蛋白酶

小鼠甲状腺滤泡上皮细胞体外培养周期有限;建议使用配套的专用生长培养基及正确的操作方法来培养,以此保证该细胞的最佳培养状态。

质量检测

实验室分离的小鼠甲状腺滤泡上皮细胞经TG(甲状腺球蛋白)免疫荧光鉴定,纯度可达90%以上,且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。

方法简介

实验室分离的小鼠甲状腺滤泡上皮细胞采用胰蛋白酶-胶原酶混合消化法结合差速贴壁法,并通过上皮细胞专用培养基培养筛选制备而来,细胞总量约为5×10⁵ cells/瓶。

操作步骤

甲状腺组织解剖取材:选用 6‑8 周龄健康小鼠,75% 酒精消毒,颈椎脱臼法处死,仰卧固定,剪开颈部皮肤、皮下肌肉,暴露气管,精准分离附着于气管两侧的甲状腺组织,注意避开甲状旁腺、周围血管、脂肪结缔组织,预冷无菌 PBS 反复漂洗组织 3 次,清除血液污染。

组织修剪粉碎与预消化处理:在无菌培养皿中将甲状腺组织仔细剔除残余脂肪与结缔组织,眼科剪剪切组织至 0.5‑1 mm³ 细小碎块,PBS 洗涤碎块 2 次,弃去上清,加入胶原酶 Ⅰ+ 胰蛋白酶复合消化液,充分浸没组织碎块。

恒温振荡消化解离组织:将装有组织与消化液离心管放置 37℃水浴摇床,转速 100 r/min 消化 40‑60 min,每 15 min 取出轻柔吹打一次,显微镜下观察大部分滤泡结构解离,立即添加含胎牛血清的上皮细胞完全培养基终止酶消化反应。

筛网过滤与离心收集细胞:细胞混合悬液依次经过 100 目、300 目无菌细胞筛过滤,滤除未消化组织块,滤液收集于无菌离心管;1200 r/min 离心 7 min,小心吸除上层上清,避免扰动底部松散细胞沉淀。

细胞重悬、纯化以及接种铺板:加入甲状腺滤泡上皮专用完全培养基轻柔重悬沉淀;利用差速贴壁法去除成纤维细胞杂细胞,短暂预贴壁 30‑45 min,收集未贴壁上皮细胞悬液,细胞计数,按照合适密度接种于培养瓶 / 板。

细胞培养维持与换液操作:置于 37℃、5% CO₂培养箱孵育,接种 24 h 后更换全部培养基,去除死亡漂浮细胞,之后每 2‑3 d 更换新鲜完全培养基,观察细胞形成滤泡样上皮片状生长形态,警惕成纤维细胞过度增殖污染。

纯度鉴定和冻存保存:采用 CK‑19 甲状腺上皮特异性标志物免疫荧光鉴定细胞纯度;细胞生长至 70‑80% 汇合度时进行冻存,配置细胞冻存液,梯度降温后液氮保存;原代上皮细胞传代能力有限,尽量使用低代次细胞开展体外实验。