小鼠脊髓神经元细胞分离自脊髓组织；脊髓是细细的管束状的神经结构，位于脊柱的椎管内且被脊椎保护；是源自脑的中枢神经系统延伸部分。中枢神经系统的细胞依靠复杂的联系来处理传递信息。脊髓的主要功能是传送脑与外周之间的神经信息。人和脊椎动物中枢神经系统的一部分，在椎管里面，上端连接延髓，两旁发出成对的神经，分布到四肢、体壁和内脏。脊髓的内部有一个H形（蝴蝶型）灰质区，主要由神经细胞构成；在灰质区周围为白质区，主要由有髓神经纤维组成；脊髓是许多简单反射的中枢。脊髓两旁发出许多成对的神经（称为脊神经）分布到全身皮肤、肌肉和内脏器官。脊髓是周围神经与脑之间的通路，也是许多简单反射活动的低级中枢。按脊神经的出入可把脊髓也分为相应的31节，31对脊神经就是由不同的脊椎发出的。神经系统最基本的结构和功能单位是神经元，即神经细胞，其大小和外观在中枢神经系统中差异很大。但都具有胞体和树突、轴突。胞体又叫核周体，内含神经丝、微管、内质网、游离核糖体和一个有明显核仁的核。一些大神经元突起的粗面内质网可用Nissl染色显示，在光镜下是灰蓝色斑块状，称为尼氏小体。树突和轴突是神经元的突起，能在神经元之间传递电冲动，突起的大小和形态各不相同，很难用常规的显微镜鉴别。脊髓组织内含有大量胶质细胞，神经元含量少，分离纯化难度大，且脊髓神经元细胞是高度分化的终末细胞，不能分裂增殖，培养要求高。刚接种的脊髓神经元呈圆形，体积小，透亮，无突起。培养2-3 d，可见胞体增大，突起增多延长；培养6-7 d，细胞体大饱满，突起明显增加延长并交织成网，光晕明显，立体感强。培养20 d后，死亡细胞明显增加，细胞出现内空泡，突起粗细不均，甚至脱壁，发生细胞崩解。
产品属性
产品名称 小鼠脊髓神经元细胞
组织来源 脊髓组织
默认种属 昆明小鼠，其他咨询
产品规格 5×10^5Cells/T25
包被条件： PLL（0.1 mg/mL）
培养基： 小鼠脊髓神经元细胞完全培养基(含B-27 Supplement、Penicillin、Streptomycin等)
换液频率： 每2-3天换液一次
生长特性： 贴壁
细胞形态： 神经元细胞样
传代比例： 不传代
传代特性： 属于终末分化细胞；属于不增殖细胞群
消化液： 0.125%胰蛋白酶
小鼠脊髓神经元细胞体外培养周期有限；建议使用配套的专用生长培养基及正确的操作方法来培养，以此保证该细胞的最佳培养状态。
质量检测
实验室分离的小鼠脊髓神经元细胞经β-Tubulin-Ⅲ免疫荧光鉴定，纯度可达90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。
方法简介
实验室分离的小鼠脊髓神经元细胞采用胶原酶-胰酶联合消化法、神经元专用培养基培养筛选结合化学试剂抑制法制备而来，细胞总量约为5×10⁵ cells/瓶。
操作步骤
实验动物预处理与组织取材：选取出生 1‑3 d 的 SPF 级小鼠，75% 乙醇全身浸泡消毒 1‑2 min，断头处死，快速剥离背部皮肤与椎骨，暴露完整脊髓组织，预冷的无菌 PBS 缓冲液冲洗表面血液与杂质，小心剔除脊髓表面脊膜、血管以及附着的结缔组织，将剥离干净的脊髓转移至盛有预冷无菌 PBS 的培养皿内，全程操作置于冰上，最大程度降低细胞凋亡。
组织剪碎与酶消化处理：无菌眼科剪将脊髓组织反复剪切至 1 mm³ 左右的细小组织碎块，吸除多余 PBS，加入预热至 37℃的胰蛋白酶‑EDTA 消化液，组织与消化液体积比控制在 1:5，置于 37℃恒温水浴箱孵育 15‑20 min，每隔 5 min 轻柔颠倒摇晃一次，促进组织充分解离，消化结束后加入含 10% 胎牛血清的完全培养基终止酶消化反应。
细胞解离与粗筛过滤：使用无菌巴氏管对消化后的组织混合液进行反复轻柔吹打 20‑30 次，吹打力度避免产生大量气泡，促使神经元从组织块中游离，依次通过 200 目、400 目无菌细胞筛进行双重过滤，去除未消化完全的组织团块、纤维残渣，收集过滤后的单细胞悬液至无菌离心管中。
离心重悬与杂质去除：1000 r/min 室温离心 5 min，小心弃去上层上清废液，加入神经元专用完全培养基轻柔重悬细胞沉淀；采用差速贴壁法去除成纤维细胞等杂细胞，将细胞悬液转移至未包被的培养瓶，37℃、5% CO₂培养箱孵育 1‑2 h，成纤维细胞优先贴壁，收集尚未贴壁的神经元细胞悬液。
培养器皿包被与细胞接种：提前用多聚‑L‑赖氨酸包被培养板 / 培养皿，4℃过夜包被，使用前吸弃包被液，无菌 PBS 洗涤 2 次；将纯化后的脊髓神经元细胞进行细胞计数，按照适宜接种密度接种至包被完成的培养器皿，加入神经元专用完全培养基。
细胞培养与换液维护：放置于 37℃、5% CO₂饱和湿度细胞培养箱进行培养，接种后 24 h 进行半量换液，后续每 2‑3 d 进行一次半量换液，换液操作时缓慢沿培养皿侧壁补加新鲜培养基，避免直接冲刷细胞层，防止神经元脱落，密切观察神经元胞体形态、突起生长延伸状态。
细胞鉴定与后续传代 / 冻存：培养 3‑5 d 后可进行细胞鉴定，采用免疫荧光染色检测 NeuN、Tuj‑1 神经元特异性标志物；原代脊髓神经元属于终末分化细胞不适合反复传代，如需保存，收集培养状态良好细胞，配置细胞冻存液，程序降温盒梯度降温后置于液氮长期保存，用于后续体外功能实验。
