小鼠骨髓造血干细胞分离自骨髓;骨髓是机体的造血组织,位于身体的许多骨骼内。成年动物的骨髓分两种:红骨髓和黄骨髓。红骨髓能制造红细胞、血小板和各种白细胞。血小板有止血作用,白细胞能杀灭与抑制各种病原体,包括细菌、病毒等;某些淋巴细胞能制造抗体。因此,骨髓不但是造血器官,它还是重要的免疫器官。骨髓是存在于长骨(如肱骨、股骨)的骨髓腔和扁平骨(如髂骨)的稀松骨质间的网眼中,是一种海绵状的组织,能产生血细胞的骨髓略呈红色,称为红骨髓。出生时,红骨髓充满全身骨髓腔,随着年龄增大,脂肪细胞增多,相当部分红骨髓被黄骨髓取代,最后几乎只有扁平骨骨髓腔中有红骨髓。造血干细胞具有自我更新能力并能分化为各种血细胞的前提细胞,最终生成各种血细胞成分,包括红细胞,白细胞和血小板。造血干细胞需要根据机体的生理需求适时的补充血液系统各个成熟细胞组分。同时在损伤、炎症等应激状态下,造血干细胞也扮演着调节和维持体内血液系统各个细胞组分的生理平衡的角色。临床治疗中,造血干细胞移植广泛应用于血液系统疾病以及自身免疫疾病,在其它实体瘤的治疗中,比如淋巴瘤,生殖细胞瘤,乳腺癌,小细胞肺癌,主要应用于常规治疗失败或复发难治以及具有不良预后因素的患者。造血干细胞以不对称有丝分裂方式进行增殖,一个干细胞分裂产生两个子细胞,一个分化为造血祖细胞,另一个则保持干细胞特征。造血干细胞在不断体外培养产生大量造血祖细胞同时,保持自己既不增殖也不分化。体外培养微环境合适,造血干细胞可持续维持培养60天左右。 造血干细胞体外增殖培养需要基质细胞滋养(滋养层细胞),缺少滋养层细胞不增殖,无法长期培养,本产品为收集培养好的造血干悬浮细胞灌装发货,不包含滋养层,因此收货后建议尽快实验。
产品属性
产品名称 小鼠骨髓造血干细胞
简称 BMHSC
组织来源 骨髓组织
默认种属 昆明小鼠,其他咨询
产品规格 5×10^5Cells/T25
培养基: 小鼠骨髓造血干细胞完全培养基(含FBS、生长添加剂、Penicillin、Streptomycin等)
换液频率: 每2-3天换液一次
生长特性: 悬浮
细胞形态: 圆形
传代比例: 不传代
传代特性: 不建议传代
消化液: 0.25%胰蛋白酶
小鼠骨髓造血干细胞体外培养周期有限;建议使用配套的专用生长培养基及正确的操作方法来培养,以此保证该细胞的最佳培养状态。
质量检测
实验室分离的小鼠骨髓造血干细胞经CD34或Sca-1免疫荧光鉴定,纯度可达90%以上,且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。
方法简介
实验室分离的小鼠骨髓造血干细胞采用冲洗骨髓、密度梯度离心、差速贴壁法结合培养基筛选制备而来,细胞总量约为5×10⁵ cells/瓶。
操作步骤
无菌准备:超净台紫外消毒 30min,准备造血干细胞专用无血清培养基、无菌 PBS、离心管,试剂室温平衡,避免高温损伤干细胞活性。
冻存细胞快速复苏:冻存管 37℃水浴快速融化,严格控制融化时间,酒精消毒管壁转入超净台,细胞悬液缓慢加入无血清培养基离心管混匀。
离心去除冻存保护剂:300g 室温离心 7min,小心吸弃上清,造血干细胞沉淀松散,操作轻柔,防止丢失细胞。
轻柔重悬细胞沉淀:加入造血干细胞无血清完全培养基,低速轻柔吹打,避免过度吹打造成干细胞损伤;台盼蓝染色计数活细胞。
接种培养:按照实验密度接种于低吸附培养板,减少细胞贴壁,维持干细胞干性功能,轻柔晃动培养板混匀细胞。
悬浮培养维护:放入 37℃、5% CO₂培养箱悬浮培养,每 2‑3 天半量换液,补充新鲜细胞因子培养基,不要全部弃掉旧培养液,避免细胞应激损伤。
细胞收取用于实验:培养结束后,直接收集悬浮细胞悬液,离心富集造血干细胞,用于移植、流式分选、集落形成实验;造血干细胞不做贴壁传代扩增。
