小鼠骨髓基质细胞分离自骨髓;骨髓是机体的造血组织,位于身体的许多骨骼内。成年动物的骨髓分两种:红骨髓和黄骨髓。红骨髓能制造红细胞、血小板和各种白细胞。血小板有止血作用,白细胞能杀灭与抑制各种病原体,包括细菌、病毒等;某些淋巴细胞能制造抗体。因此,骨髓不但是造血器官,它还是重要的免疫器官。骨髓是存在于长骨(如肱骨、股骨)的骨髓腔和扁平骨(如髂骨)的稀松骨质间的网眼中,是一种海绵状的组织,能产生血细胞的骨髓略呈红色,称为红骨髓。出生时,红骨髓充满全身骨髓腔,随着年龄增大,脂肪细胞增多,相当部分红骨髓被黄骨髓取代,最后几乎只有扁平骨骨髓腔中有红骨髓。骨髓基质细胞是一类具有多向分化潜能的干细胞,其中部分细胞有自我复制、高度增殖和多向分化能力,在特定培养条件下可向骨、软骨、神经胶质细胞、心肌、骨胳肌、脂肪细胞、血管内皮细胞等间叶组织细胞转化。骨髓基质细胞在自然条件下主要分化为成骨细胞,在不同的培养条件下其分化途径不同,其在成骨细胞与成脂细胞分化之间呈反向变化。
产品属性
产品名称 小鼠骨髓基质细胞
组织来源 骨髓
默认种属 昆明小鼠,其他咨询
产品规格 5×10^5Cells/T25
培养基: 小鼠骨髓基质细胞完全培养基(含FBS、生长添加剂、Penicillin、Streptomycin等)
换液频率: 每2-3天换液一次
生长特性: 贴壁
细胞形态: 成纤维细胞样
传代比例: 1:2
传代特性: 可传3代左右
消化液: 0.25%胰蛋白酶
小鼠骨髓基质细胞体外培养周期有限;建议使用配套的专用生长培养基及正确的操作方法来培养,以此保证该细胞的最佳培养状态。
质量检测
实验室分离的小鼠骨髓基质细胞经CD29或CD44免疫荧光鉴定,纯度可达90%以上,且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。
方法简介
实验室分离的小鼠骨髓基质细胞采用密度梯度离心法结合差速贴壁法制备而来,细胞总量约为5×10⁵ cells/瓶。
操作步骤
无菌准备:超净台紫外消毒 30min,准备骨髓基质细胞完全培养基、无菌 PBS、胰酶消化液,试剂 37℃水浴预热,备好 T25 培养瓶、离心管,标记细胞信息。
冻存细胞复苏:冻存管 37℃水浴快速融化,酒精擦拭管壁,转入超净台,细胞悬液缓慢滴入含有预热完全培养基的 15mL 离心管中轻柔混匀。
离心去除冻存保护剂:300g 室温离心 5min,小心吸弃上清,切勿吸到底部细胞沉淀。
重悬制备细胞悬液:加入完全培养基,轻柔吹打沉淀 8‑10 次打散细胞团,进行细胞计数,按合适密度接种到 T25 培养瓶,多角度晃动培养瓶使细胞均匀铺底。
恒温孵育贴壁:放入 37℃、5% CO₂饱和湿度培养箱,静置培养,复苏后前 48 小时尽量不要移动培养瓶,利于基质细胞贴壁。
换液去除悬浮杂质:培养 48h 后首次换液,吸除旧培养基,PBS 轻柔漂洗细胞层,清除悬浮血细胞、死细胞碎片,补充新鲜完全培养基,每 2‑3 天换液,观察梭形基质细胞生长。
消化传代收获:细胞汇合 75‑80%,弃培养基,PBS 洗涤,加入胰酶消化,镜下细胞回缩变圆,加入完全培养基终止消化;收集悬液离心,计数后传代扩增或者收集细胞做体外共培养实验。
