小鼠表皮角化细胞分离自皮肤组织；表皮位于动物皮肤的外层，由胚胎时期外胚层形成，具有抗摩擦和抗损伤的作用。表皮是皮肤的浅层结构，由复层扁平上皮构成。从基底层到表面可分为五层，即基底层、棘层、颗粒层、透明层和角质层。依据细胞的分化状态、功能类型可以分为多种细胞类型，表皮角化上皮细胞与角质形成细胞核心细胞群体本质是同一细胞群体，前者从“表皮属角化复层扁平上皮”的组织属性命名，后者从“合成角蛋白、执行角化功能”的功能特征命名，二者均涵盖表皮从基底层增殖细胞到角质层终末细胞的全分化谱系，且占表皮细胞总量超90%，是表皮屏障功能的核心载体。在这一分化谱系中，存在明确的阶段差异：基底层细胞是角质形成细胞的“增殖源头”，呈柱状、有完整活性细胞核，以K5、K14、Ki-67、干细胞标志物p63为核心，无角化相关蛋白，未启动角化，一般描述为角化形成细胞/角质形成细胞/角化上皮细胞等；当细胞迁移至棘层中上部至颗粒层，成为“角化细胞”——这是仍含固缩细胞核（但细胞器减少）的中间活细胞，能主动合成角蛋白与丝聚蛋白前体，处于“正在角化”的执行阶段，表达切换为K1、K10为主，同时表达丝聚蛋白前体（丝聚合蛋白原，颗粒层特征）、转谷氨酰胺酶1（TG1，促进角蛋白交联），Ki-67阴性；最终角化细胞进一步退化，在角质层形成“角质细胞”（角质层终末细胞），这是无细胞核、无细胞器的终末细胞，胞质充满交联角蛋白纤维，通过细胞间连接构成表皮物理屏障，无核相关标志物，以终末成熟标志物兜甲蛋白、小富脯蛋白（SPRRs）为特征，K1、K10持续存在但无活性合成功能；PCNA是增殖细胞的标志物，表皮角质形成细胞在基底层（增殖活跃区）可能表达PCNA，而终末分化层（角质层）可能不表达，细胞在不同增殖状态表达量不一样；这四种细胞的核心差异在于分化阶段（全阶段/中间态/终末态）、形态（核与细胞器有无/活性）及功能（增殖/合成/屏障），且存在“角质形成细胞（表皮角化上皮细胞）包含角化细胞与角质细胞”的逻辑关系。表皮也包含其他非角化上皮细胞：黑色素细胞（Melanocytes）、朗格汉斯细胞（Langerhanscells）、Merkel细胞等。
产品属性
产品名称 小鼠表皮角化细胞
组织来源 皮肤组织
默认种属 昆明小鼠，其他咨询
产品规格 5×10^5Cells/T25
包被条件： 鼠尾胶原Ⅰ（2-5 μg/cm²）
培养基： 小鼠表皮角化细胞完全培养基(含FBS、生长添加剂、Penicillin、Streptomycin等)
换液频率： 每2-3天换液一次
生长特性： 贴壁
细胞形态： 上皮细胞样
传代特性： 不增殖；不传代
消化液： 0.25%胰蛋白酶
小鼠表皮角化细胞体外培养周期有限；建议使用配套的专用生长培养基及正确的操作方法来培养，以此保证该细胞的最佳培养状态。
质量检测
实验室分离的小鼠表皮角化细胞经K1免疫荧光鉴定，纯度可达90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。
方法简介
实验室分离的小鼠表皮角化细胞先中性蛋白酶消化、后胰蛋白酶-胶原酶混合消化法制备而来，细胞总量约为5×10⁵ cells/瓶。
操作步骤
步骤一：无菌实验前期筹备 提前30分钟紫外灭菌超净工作台及所有实验耗材、试剂，校准培养箱温度、CO₂浓度与湿度。提前预热表皮角化细胞专用完全培养基、无菌PBS缓冲液、胰蛋白酶消化液，确认试剂无浑浊、污染、过期。操作人员规范无菌操作，手部、器械全程酒精消毒，搭建洁净实验环境。
步骤二：恒温快速解冻复苏 取出液氮冻存的小鼠表皮角化细胞，迅速置于37℃恒温水浴晃动解冻，严格控制解冻时长1分钟内，留存微量冰晶取出。酒精消毒冻存管外壁，无菌将细胞悬液转移至含预热完全培养基的离心管中，轻柔混匀，稀释冻存保护剂，最大程度保留细胞活性。
步骤三：离心纯化清洗细胞 设置离心机室温250g、5分钟离心，使活细胞沉降，分离上清杂质与死细胞碎片。离心后吸弃上层废液，加入预热无菌PBS缓冲液轻柔重悬细胞，再次离心清洗，彻底去除残留冻存液与代谢废弃物，保证细胞纯度达标。
步骤四：精准密度接种 吸净PBS废液，加入角化细胞专用培养基，轻柔吹打制备均匀单细胞悬液，计数后调整细胞密度至1.1×10⁵个/mL，接种至无菌培养瓶中。轻轻晃动培养瓶，使细胞均匀分布，利于细胞贴壁增殖、有序角化生长。
步骤五：稳定恒温培养 将培养瓶置于37℃、5%CO₂饱和湿度培养箱静置培养24小时，全程保持环境参数稳定，禁止随意扰动。小鼠表皮角化细胞生长周期稳定，恒温恒湿环境可有效促进细胞贴壁、进入正常增殖分化周期。
步骤六：定时换液养护 培养24小时后观察细胞贴壁状态，完成首次换液，吸弃陈旧培养基，补充新鲜预热完全培养基，去除悬浮死细胞与代谢废物。后续每48小时换液一次，持续维持营养充足、环境洁净，保障细胞正常增殖角化。
步骤七：规律传代培养 细胞融合度达85%-90%时进行传代操作，PBS清洗细胞表面2次，加入胰酶消化液消化3分钟，显微镜观察细胞回缩脱壁后立即终止消化。吹打收集细胞悬液，离心重悬后按1:3比例分瓶传代，持续扩增，定期观察细胞角化形态与生长状态。
