兔椎间盘髓核细胞分离椎间盘组织；椎间盘是位于脊柱两椎体之间，分为中央部的髓核，富于弹性的胶状物质；周围部的纤维环，由多层纤维软骨环按同心圆排列。上下有软骨板，是透明软骨复盖于椎体上，下面骺环中间的骨面。上下的软骨板与纤维环一起将髓核密封起来。纤维环由胶原纤维束的纤维软骨构成，位于髓核的四周。纤维环的纤维束相互斜行交叉重叠，使纤维环成为坚实的组织，能承受较大的弯曲和扭转负荷。髓核，是乳白色半透明胶状体，富于弹性，为椎间盘结构的一部分，位于两软骨板与纤维环之间。由纵横交错的纤维网状结构即软骨细胞和蛋白多糖黏液样基质构成的弹性胶冻物质。婴幼儿时期的髓核含水量为80%-90%，即使到了老年，其含水量也在70%上下。髓核在出生时体积大而松散，位于椎间盘的中央，至成年时位置移至椎间盘的中后部；在成年以前构成髓核的主要物质是大量蛋白多糖复合体、胶原纤维和纤维软骨，随着年龄的增长，髓核中的蛋白多糖解聚增多，水分逐渐减少，胶原增粗并逐渐被纤维软骨所替代。
产品属性
产品名称 兔椎间盘髓核细胞
简称 NPCs
组织来源 椎间盘组织
默认种属 新西兰大白兔，其他咨询
产品规格 5×10^5Cells/T25
培养基： 兔椎间盘髓核细胞完全培养基(含FBS、生长添加剂、Penicillin、Streptomycin等)
换液频率： 每3-4天换液一次
生长特性： 贴壁
细胞形态： 梭形、多角形
传代比例： 1:2
传代特性： 可传5代左右；3代以内状态最佳
消化液： 0.25%胰蛋白酶
兔椎间盘髓核细胞体外培养周期有限；建议使用配套的专用生长培养基及正确的操作方法来培养，以此保证该细胞的最佳培养状态。
质量检测
实验室分离的兔椎间盘髓核细胞经Ⅱ型胶原蛋白免疫荧光鉴定，纯度可达90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。
方法简介
实验室分离的兔椎间盘髓核细胞采用胶原酶-中性蛋白酶混合消化法并结合软骨细胞专用培养基培养筛选制备而来，细胞总量约为5×10⁵ cells/瓶。
操作步骤
1. 细胞复苏：取出冻存兔椎间盘髓核细胞冻存管，37℃水浴快速融化冻存液，仅剩微小冰晶时取出冻存管，75% 酒精擦拭管壁，移入生物安全柜，将细胞悬液缓慢加入髓核细胞专用完全培养基的离心管。
2. 离心去除冻存保护剂：离心管配平，1000rpm 离心 5min，离心结束，小心吸弃上层冻存上清液，髓核原代细胞沉淀松散，吸上清操作尽量靠近液面。
3. 温和重悬细胞沉淀：加入预热兔椎间盘髓核细胞完全培养基，低力度反复吹打管底沉淀，打散细胞团块，制备单细胞悬液，髓核细胞比较脆弱，严禁暴力吹打。
4. 计数接种培养器皿：完成活细胞计数，按照髓核细胞适宜接种密度接种培养瓶，接种后十字轻晃培养瓶，细胞均匀铺于瓶底。
5. 培养箱静置贴壁孵育：将培养瓶平稳放置 37℃、5% CO₂饱和湿度细胞培养箱，静置孵育 24h，尽量减少开启培养箱，保障髓核细胞贴壁。
6. 初次换液清除悬浮碎片：24h 后显微镜镜检贴壁状态，弃除旧培养基，清除悬浮死细胞与碎片，补入预热新鲜完全培养基放回培养箱。
7. 扩增培养传代实验：每 2‑3 天更换新鲜完全培养基，监控细胞形态，汇合度达到 80% 左右进行传代，用于椎间盘退变相关体外模型构建。
