兔真皮微血管内皮细胞分离自真皮组织；真皮，位于表皮深层，向下与皮下组织相连，真皮结缔组织的胶原纤维和弹性纤维互相交织在一起，埋于基质内。其内分布着各种结缔组织细胞和大量的胶原纤维弹性纤维，使皮肤既有弹性，又有韧性。其由两层组成——乳头层与网状层。真皮的结构组成是胶原蛋白、弹性纤维以及基质。微血管内皮细胞（MEC）在炎症反应、肿瘤生长、创面愈合过程中起着非常重要的作用。在创面愈合研究领域，由于表皮细胞、真皮成纤维细胞体外培养技术的成熟，人们对这两种细胞早已进行了大量深入的研究。与之相比，对参与创面愈合过程的另一种主要细胞——真皮微血管内皮细胞，则因其体外分离培养技术的困难而使相关的研究受限。
产品属性
产品名称 兔真皮微血管内皮细胞
简称 DMECs
组织来源 皮肤组织
默认种属 新西兰大白兔，其他咨询
产品规格 5×10^5Cells/T25
包被条件： PLL（0.1 mg/mL）或明胶（0.1%）
培养基： 兔真皮微血管内皮细胞完全培养基(含FBS、生长添加剂、Penicillin、Streptomycin等)
换液频率： 每2-3天换液一次
生长特性： 贴壁
细胞形态： 内皮细胞样
传代比例： 1:2
传代特性： 可传2-3代
消化液： 0.25%胰蛋白酶
兔真皮微血管内皮细胞体外培养周期有限；建议使用配套的专用生长培养基及正确的操作方法来培养，以此保证该细胞的最佳培养状态。
质量检测
实验室分离的兔真皮微血管内皮细胞经CD31免疫荧光鉴定，纯度可达90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。
方法简介
实验室分离的兔真皮微血管内皮细胞采用胶原酶-中性蛋白酶混合消化法结合密度梯度离心法、最后通过内皮细胞专用培养基培养筛选制备而来，细胞总量约为5×10⁵ cells/瓶。
操作步骤
1. 细胞复苏：取出冻存兔真皮微血管内皮细胞冻存管，37℃水浴快速融化冻存样本，少量冰晶残留取出，酒精消毒管壁，安全柜中将细胞悬液缓慢加入内皮细胞专用完全培养基的离心管。
2. 离心去除冻存保护剂：离心管配平，1000rpm 离心 5min，离心结束，小心吸除上清冻存液，内皮细胞沉淀松散，吸上清时避免触碰管底。
3. 温和重悬细胞沉淀：加入预热兔真皮微血管内皮细胞完全培养基，轻柔吹打沉淀，打散细胞团块，制备单细胞悬液，内皮细胞对机械剪切耐受弱，吹打力度轻柔。
4. 计数接种培养瓶：活细胞计数，按照微血管内皮细胞适宜接种密度接种，接种完成十字轻晃培养瓶，细胞均匀分布培养底面。
5. 培养箱静置孵育贴壁：培养瓶放置 37℃、5% CO₂饱和湿度培养箱，静置孵育 24h，减少移动，保障内皮细胞贴壁。
6. 初次换液去除悬浮碎片：24h 后显微镜镜检贴壁状态，弃旧培养基，清除悬浮死细胞碎片，添加预热新鲜完全培养基放回培养箱。
7. 维持培养传代实验：间隔 2‑3 天更换培养基，观察内皮细胞多边形形态，汇合度 80%‑85% 进行消化传代，用于血管生成相关体外模型。
