兔真皮成纤维细胞分离自真皮组织；皮肤组织来源包括头部、脸部、手、脚、腿、背部、腹部、包皮等体表部位皮肤，可依据需求选用；真皮，位于表皮深层，向下与皮下组织相连，真皮结缔组织的胶原纤维和弹性纤维互相交织在一起，埋于基质内。其内分布着各种结缔组织细胞和大量的胶原纤维弹性纤维，使皮肤既有弹性，又有韧性。其由两层组成——乳头层与网状层。真皮的结构组成是胶原蛋白、弹性纤维以及基质。成纤维细胞（Fibroblast）是疏松结缔组织的主要细胞成分，由胚胎时期的间充质细胞分化而来。成纤维细胞较大，轮廓清楚，多为突起的纺锤形或星形的扁平状结构，其细胞核呈规则的卵圆形，核仁大而明显。成纤维细胞功能活动旺盛，细胞质嗜弱碱性，具明显的蛋白质合成和分泌活动，在一定条件下，它可以实现跟纤维细胞的互相转化；成纤维细胞对不同程度的细胞变性、坏死和组织缺损的修复有着十分重要的作用。刚分离的真皮成纤维细胞呈圆形、折光性良好，悬浮于培养基中。30 min细胞贴壁，其中部分开始伸出伪足，表现为小的突起；6 h后细胞基本贴壁完全，伸展成梭形，胞核清晰，分布较均匀，散在生长，不聚集成团；细胞生长迅速，5-7天即呈融合状态，细胞排列紧密，有的交叉重叠生长，平坦、胞体较大，细胞质透明，细胞核较大，呈椭圆形，颜色淡。细胞融合，并彼此连接成网状；细胞呈突起的纺锤形或星形的扁平分布。真皮成纤维细胞在生理条件下的主要功能包括：构造和维持组织的正常形态，合成和释放细胞外基质以及组织损伤后及时大量聚集修复损伤组织。
产品属性
产品名称 兔真皮成纤维细胞
组织来源 皮肤组织
默认种属 新西兰大白兔，其他咨询
产品规格 5×10^5Cells/T25
培养基： 兔真皮成纤维细胞完全培养基(基础培养基，含FBS、bFGF、Insulin、Penicillin、Streptomycin等)
换液频率： 每2-3天换液一次
生长特性： 贴壁
细胞形态： 成纤维细胞样
传代比例： 1:2
传代特性： 可传5代左右；3代以内状态最佳
消化液： 0.25%胰蛋白酶
兔真皮成纤维细胞体外培养周期有限；建议使用配套的专用生长培养基及正确的操作方法来培养，以此保证该细胞的最佳培养状态。
质量检测
实验室分离的兔真皮成纤维细胞经Vimentin免疫荧光鉴定，纯度可达90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。
方法简介
实验室分离的兔真皮成纤维细胞采用先中性蛋白酶消化、后胰蛋白酶-胶原酶混合消化法结合差速贴壁法制备而来，细胞总量约为5×10⁵ cells/瓶。
操作步骤
1. 细胞复苏：取出冻存兔真皮成纤维细胞冻存管，投入 37℃水浴快速融化，残留微小冰晶即刻取出，75% 酒精擦拭管壁，移入生物安全柜，将细胞悬液缓慢滴入装有完全培养基的无菌离心管稀释冻存液。
2. 离心去除冻存保护剂：离心管配平，1000rpm 离心 5min，离心结束后，缓慢吸弃上层全部上清液，保留管底完整细胞沉淀。
3. 重悬制备单细胞悬液：加入预热兔真皮成纤维细胞完全培养基，轻柔吹打管底沉淀，充分打散细胞团聚物，得到分散均匀的单细胞悬液。
4. 计数接种铺瓶：对悬液开展活细胞计数，按照推荐接种密度接种细胞培养瓶，接种结束后十字方向晃动培养瓶，使细胞均匀铺在瓶底。
5. 培养箱静置贴壁生长：将培养瓶放入 37℃、5% CO₂饱和湿度细胞培养箱，静置孵育 24h，期间禁止挪动培养瓶，给成纤维细胞充足贴壁伸展时间。
6. 首次换液清除死细胞：孵育 24h 后取出，倒置显微镜观察贴壁情况，吸弃旧培养基，去除悬浮死亡细胞和碎片，补入预热新鲜完全培养基放回培养箱。
7. 常规培养传代应用：每 2‑3 天更换新鲜完全培养基，观察梭形成纤维细胞形态，细胞汇合达到 80‑85%，即可胰酶消化传代，用于皮肤修复相关体外实验。
