兔胰腺星状细胞分离自胰腺组织;胰腺分为外分泌腺和内分泌腺两部分。外分泌腺由腺泡和腺管组成,腺泡分泌胰液,腺管是胰液排出的通道。胰液中含有碳酸氢钠、胰蛋白酶原、脂肪酶、淀粉酶等。胰液通过胰腺管排入十二指肠,有消化蛋白质、脂肪和糖的作用。内分泌腺由大小不同的细胞团──胰岛所组成,胰岛主要由4种细胞组成:α细胞、β细胞、γ细胞及PP细胞。α细胞分泌胰高血糖素,升高血糖;β细胞分泌胰岛素,降低血糖;γ细胞分泌生长抑素,以旁分泌的方式抑制α、β细胞的分泌;PP细胞分泌胰多肽,抑制胃肠运动、胰液分泌和胆囊收缩。纤维化是慢性胰腺炎的典型病理特征,活化的胰腺星状细胞(PSC)是胰腺纤维化的主要效应细胞,PSC分离和成功培养是体外研究胰腺纤维化的重要前提。未活性化的PSC胞浆中富含维A脂滴,并表达Desmin蛋白,活化后的PSC则表达α-平滑肌肌动蛋白(alpha-SMA)。PSC具有静息态与激活态两种,并分别具有特异的标志物。静息状态PSC胞质内富含的维生素A脂滴可以被油红O染成红色,阳性表达Desmin。激活状态PSC阳性表达alpha-SMA。油红O染色发现,原代分离的细胞培养6 d,胞浆中仍可见明显的脂滴,传代后,橙红色的脂滴颗粒显著减少甚至消失。免疫细胞化学染色显示,细胞接种24 h仍然表达Desmin,48 h后Desmin基本不再表达。培养48 h后绝大多数细胞开始表达alpha-SMA,随着培养时间的增长和传代次数的增加,细胞表达alpha-SMA,而不再表达Desmin,说明细胞活化。提示PSC接种24 h后即启动了激活过程,至培养第6 d大多数细胞激活,传代后细胞处于高度激活状态。原代胰腺星状细胞可作为慢性胰腺炎新药的细胞筛选模型,目前研究发现:胰腺受损时,在各种刺激因子作用下使胰腺星状细胞活化,导致细胞形态、功能发生变化,促使基质增生、胶原蛋白的大量生成及不规则沉积。
产品属性
产品名称 兔胰腺星状细胞
简称 PSCs
组织来源 胰腺组织
默认种属 新西兰大白兔,其他咨询
产品规格 5×10^5Cells/T25
培养基: 兔胰腺星状细胞完全培养基(含FBS、生长添加剂、Penicillin、Streptomycin等)
换液频率: 每2-3天换液一次
生长特性: 贴壁
细胞形态: 成纤维细胞样
传代比例: 1:2
传代特性: 可传3-5代
消化液: 0.25%胰蛋白酶
兔胰腺星状细胞体外培养周期有限;建议使用配套的专用生长培养基及正确的操作方法来培养,以此保证该细胞的最佳培养状态。
质量检测
实验室分离的兔胰腺星状细胞经α-SMA或Desmin免疫荧光鉴定,纯度可达90%以上,且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。
方法简介
实验室分离的兔胰腺星状细胞采用胶原酶消化法制备而来,细胞总量约为5×10⁵ cells/瓶。
操作步骤
1. 细胞复苏:取出冻存兔胰腺星状细胞冻存管,37℃水浴快速融化冻存液,少量冰晶留存时取出冻存管,酒精擦拭管壁,安全柜中将细胞悬液缓慢转移至含有专用完全培养基的离心管。
2. 离心去除冻存保护试剂:离心管配平,1000rpm 离心 5min,离心完成,小心吸弃上层冻存上清,不要扰动管底星状细胞沉淀。
3. 重悬打散细胞沉淀:加入预热兔胰腺星状细胞完全培养基,轻柔反复吹打管底沉淀,打散细胞团块,制备成均匀单细胞悬液,减少机械损伤。
4. 计数接种至培养器皿:活细胞计数,按照标准接种密度接种细胞培养瓶,接种完成后十字晃动培养瓶,使细胞均匀分布瓶底。
5. 培养箱静置贴壁孵育:将培养瓶平稳放置于 37℃、5% CO₂饱和湿度培养箱,静置孵育 24h,不移动培养瓶,保障星状细胞贴壁活化。
6. 初次换液去除悬浮杂质:孵育 24h 后镜检细胞贴壁状态,弃除旧培养基,去除悬浮死细胞碎片,添加预热新鲜完全培养基放回培养箱。
7. 维持培养传代处理:后续每 2‑3 天更换培养基,观察星状细胞活化形态,细胞汇合 80‑85%,进行胰酶消化传代,用于胰腺纤维化相关体外实验。
