兔胰腺导管上皮细胞分离自胰腺组织;胰腺分为外分泌腺和内分泌腺两部分。外分泌腺由腺泡和腺管组成,腺泡分泌胰液,腺管是胰液排出的通道。胰液中含有碳酸氢钠、胰蛋白酶原、脂肪酶、淀粉酶等。胰液通过胰腺管排入十二指肠,有消化蛋白质、脂肪和糖的作用。内分泌腺由大小不同的细胞团──胰岛所组成,胰岛主要由4种细胞组成:α细胞、β细胞、γ细胞及PP细胞。α细胞分泌胰高血糖素,升高血糖;β细胞分泌胰岛素,降低血糖;γ细胞分泌生长抑素,以旁分泌的方式抑制α、β细胞的分泌;PP细胞分泌胰多肽,抑制胃肠运动、胰液分泌和胆囊收缩。成体胰腺导管上皮细胞作为胰腺前体细胞,已证实具多向分化潜能,在合适的外源性刺激下可分化成胰岛样细胞,胰腺导管上皮细胞转分化的胰岛样细胞免疫原性如何,转分化的胰岛样细胞在治疗糖尿病时是否发生免疫排斥反应,对干细胞临床治疗糖尿病具有重要意义。
产品属性
产品名称 兔胰腺导管上皮细胞
组织来源 胰腺组织
默认种属 新西兰大白兔,其他咨询
产品规格 5×10^5Cells/T25
包被条件: 鼠尾胶原Ⅰ(2-5 μg/cm²)
培养基: 兔胰腺导管上皮细胞完全培养基(基础培养基,含FBS、EGF、Hydrocortisone、肾上腺素、甲状腺素、Insulin、Transferrin、Selenium Solution、Penicillin、Streptomycin等)
换液频率: 每2-3天换液一次
生长特性: 贴壁
细胞形态: 上皮细胞样
传代比例: 1:2
传代特性: 可传1-2代
消化液: 0.25%胰蛋白酶
兔胰腺导管上皮细胞体外培养周期有限;建议使用配套的专用生长培养ᡟ餤ᡟ
质量检测
实验室分离的兔胰腺导管上皮细胞经Cytokeratin-19免疫荧光鉴定,纯度可达90%以上,且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。
方法简介
实验室分离的兔胰腺导管上皮细胞采用胰蛋白酶-胶原酶混合消化法结合密度梯度离心法、差速贴壁法,并通过上皮细胞专用培养基培养筛选制备而来,细胞总量约为5×10⁵ cells/瓶。
操作步骤
1. 细胞复苏:取出冻存兔胰腺导管上皮细胞冻存管,37℃水浴快速融化,少量冰晶残留即可取出,酒精擦拭管壁消毒,移入安全柜,缓慢将细胞悬液加入含有胰腺导管上皮完全培养基的离心管。
2. 离心去除冻存保护剂:离心管配平,1000rpm 离心 5min,离心结束,小心吸取丢弃上清液,胰腺来源上皮细胞沉淀松散,避免吸走细胞。
3. 轻柔重悬细胞沉淀:加入预热兔胰腺导管上皮细胞完全培养基,轻柔吹打管底沉淀,打散团聚细胞,制备单细胞悬液,降低吹打力度减少细胞损伤。
4. 细胞计数接种培养瓶:活细胞计数之后,按照推荐接种密度接种培养瓶,接种完毕十字轻晃培养瓶,使细胞均匀铺展瓶底,避免局部堆积。
5. 培养箱静置孵育贴壁:将培养瓶放入 37℃、5% CO₂饱和湿度细胞培养箱,静置 24h,期间不要挪动培养瓶,给导管上皮细胞充足贴壁时间。
6. 首次换液清除死细胞碎片:24h 后取出显微镜观察贴壁,弃去旧培养基,清除悬浮死亡细胞,补入预热新鲜完全培养基,放回培养箱。
7. 后续培养传代实验:每 2‑3 天更换新鲜培养基,观察导管上皮细胞形态,细胞汇合 80%‑85% 进行消化传代,可用于胰腺体外相关研究实验。
