兔羊膜间质细胞分离自胎盘组织;胎盘(placenta)是哺乳动物妊娠期间由胚胎的胚膜和母体子宫内膜联合长成的母子间交换物质的过渡性器官,由羊膜、叶状绒毛膜和底蜕膜构成。胎儿在子宫中发育,依靠胎盘从母体取得营养,而双方保持相当的独立性。胎盘还产生多种维持妊娠的激素,是一个重要的内分泌器官。有些爬行类和鱼类也以胎生方式繁殖后代,胚胎生长出一些辅助结构如卵黄囊、鳃丝等与母体组织紧密结合,以达到母子间物质的交换,这样的结构称假胎盘。羊膜是胎盘的最内层,与眼结膜组织结构相似,含有眼表上皮细胞,包括结膜细胞和角膜上皮细胞生长所需要的物质,其光滑,无血管、神经及淋巴,具有一定的弹性;在电镜下,其分为五层:上皮层、基底膜、致密层、纤维母细胞层和海绵层,羊膜基底膜和羊膜羊膜基质层含有大量不同的胶元,主要为Ⅰ、Ⅲ、Ⅳ、Ⅴ、Ⅶ型胶原和纤维粘连蛋白、层粘连蛋白等成份。羊膜细胞主要由羊膜上皮细胞和羊膜间充质细胞组成,均具有多分化潜能,可转化为神经元,且还有合成、释放生物活性物质和神经营养因子的功能。
产品属性
产品名称 兔羊膜间质细胞
组织来源 胎盘组织
默认种属 新西兰大白兔,其他咨询
产品规格 5×10^5Cells/T25
培养基: 兔羊膜间质细胞完全培养基(含FBS、生长添加剂、Penicillin、Streptomycin等)
换液频率: 每2-3天换液一次
生长特性: 贴壁
细胞形态: 成纤维细胞样
传代比例: 1:2
传代特性: 可传3代左右
消化液: 0.25%胰蛋白酶
兔羊膜间质细胞体外培养周期有限;建议使用配套的专用生长培养基及正确的操作方法来培养,以此保证该细胞的最佳培养状态。
质量检测
实验室分离的兔羊膜间质细胞经Vimentin免疫荧光鉴定,纯度可达90%以上,且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。
方法简介
实验室分离的兔羊膜间质细胞采用胰蛋白酶-胶原酶混合消化法结合差速贴壁法,并通过上皮细胞专用培养基培养筛选制备而来,细胞总量约为5×10⁵ cells/瓶。
操作步骤
1. 细胞复苏:取出冻存兔羊膜间质细胞冻存管,37℃水浴快速融化冻存液,留有少量冰晶时取出,酒精擦拭管壁,安全柜中将细胞悬液缓慢加入装有完全培养基的离心管,稀释冻存保护剂。
2. 离心去除冷冻保护剂:配平离心管,1000rpm 离心 5min,离心完成,小心吸除全部上清液,保留管底细胞沉淀,切勿扰动沉淀。
3. 重悬离散细胞沉淀:加入预温兔羊膜间质细胞专用完全培养基,反复轻柔吹打沉淀,打散细胞聚集体,获得均一的单细胞悬液,吹打力度温和,减少细胞凋亡损伤。
4. 计数接种铺瓶:对悬液进行活细胞计数,按照标准接种密度接种细胞培养瓶,接种完成后采用十字摇晃法混匀细胞,使细胞均匀分布培养底面。
5. 培养箱孵育贴壁:将培养瓶平稳放入 37℃、5% CO₂饱和湿度培养箱,静置培养 24h,不挪动培养瓶,给予间质细胞充足贴壁时间。
6. 初次换液去除悬浮杂质:24h 后镜检细胞贴壁状态,弃去旧培养基,清除悬浮死亡细胞,添加预热新鲜完全培养基,放回培养箱继续扩增培养。
7. 维持培养及传代:后续每 2‑3 天更换培养基,观察细胞间质样形态,细胞汇合度达到 80%‑85%,开展胰酶消化传代,或者用于组织修复相关体外实验。
