兔牙龈成纤维细胞分离自牙龈组织；牙龈指紧贴于牙颈周围及邻近的牙槽骨上淡红色的结构，由复层扁平上皮及固有层组成。是口腔黏膜的一部分，血管丰富，呈淡红色，坚韧而有弹性，因缺乏黏膜下层，直接与骨膜紧密相连，故牙龈不能移动。成纤维细胞（Fibroblast）是疏松结缔组织的主要细胞成分，由胚胎时期的间充质细胞分化而来。成纤维细胞较大，轮廓清楚，多为突起的纺锤形或星形的扁平状结构，其细胞核呈规则的卵圆形，核仁大而明显。成纤维细胞功能活动旺盛，细胞质嗜弱碱性，具明显的蛋白质合成和分泌活动，在一定条件下，它可以实现跟纤维细胞的互相转化；成纤维细胞对不同程度的细胞变性、坏死和组织缺损的修复有着十分重要的作用。刚分离的表皮成纤维细胞呈圆形、折光性良好，悬浮于培养基中。30 min细胞贴壁，其中部分开始伸出伪足，表现为小的突起；6 h后细胞基本贴壁完全，伸展成梭形，胞核清晰，分布较均匀，散在生长，不聚集成团；细胞生长迅速，5-7天即呈融合状态，细胞排列紧密，有的交叉重叠生长，平坦、胞体较大，细胞质透明，细胞核较大，呈椭圆形，颜色淡。细胞融合，并彼此连接成网状；细胞呈突起的纺锤形或星形的扁平分布。
产品属性
产品名称 兔牙龈成纤维细胞
组织来源 牙龈组织
默认种属 新西兰大白兔，其他咨询
产品规格 5×10^5Cells/T25
培养基： 兔牙龈成纤维细胞完全培养基(基础培养基，含FBS、bFGF、Insulin、Penicillin、Streptomycin等)
换液频率： 每2-3天换液一次
生长特性： 贴壁
细胞形态： 成纤维细胞样
传代比例： 1:2
传代特性： 可传5代左右；3代以内状态最佳
消化液： 0.25%胰蛋白酶
兔牙龈成纤维细胞体外培养周期有限；建议使用配套的专用生长培养基及正确的操作方法来培养，以此保证该细胞的最佳培养状态。
质量检测
实验室分离的兔牙龈成纤维细胞经Vimentin免疫荧光鉴定，纯度可达90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。
方法简介
实验室分离的兔牙龈成纤维细胞采用胰蛋白酶-胶原酶混合酶消化后差速贴壁制备而来，细胞总量约为5×10⁵ cells/瓶。
操作步骤
1. 细胞复苏：取出冻存的兔牙龈成纤维细胞冻存管，快速投入 37℃水浴，轻柔摇晃 1‑2min，待管内冰晶几乎完全融化，75% 酒精擦拭冻存管外壁后移入生物安全柜，将细胞悬液缓慢滴加到含有完全培养基的离心管中，轻柔吹打混匀。
2. 离心去除冻存保护剂：将装有细胞悬液的离心管配平放入离心机，1000rpm 离心 5min，离心结束后小心吸弃上层含 DMSO 的上清液，注意不要触碰管底细胞沉淀。
3. 重悬细胞沉淀：向离心管内加入预温的兔牙龈成纤维细胞专用完全培养基，使用无菌移液管轻柔反复吹打管底沉淀，充分打散细胞团，制备成均匀的单细胞悬液，避免大力吹打造成细胞机械损伤。
4. 细胞接种铺板：取适量细胞悬液进行细胞计数，按照推荐接种密度接种至细胞培养瓶或者培养板中，轻轻前后、左右晃动培养器皿，使细胞均匀分布于培养器皿底面，防止细胞局部堆积成团。
5. 细胞培养孵育：将接种完成的细胞放置于 37℃、5% CO₂饱和湿度的细胞培养箱中静置培养，静置 24h，期间不要随意挪动培养瓶，给细胞充足贴壁时间。
6. 换液去除死细胞：培养 24h 后取出细胞，显微镜下观察细胞贴壁状态，吸弃旧培养基，去除悬浮死亡细胞与细胞碎片，加入新鲜预热完全培养基，放回培养箱继续培养。
7. 传代 / 后续维护培养：后续每 2‑3 天更换一次新鲜完全培养基，显微镜持续监控细胞形态、汇合度，当细胞汇合度达到 80‑85% 时，即可开展胰酶消化传代或者用于后续体外实验。
