兔下丘脑神经元细胞分离自下丘脑；下丘脑又称丘脑下部，位于大脑腹面、丘脑的下方，是调节内脏活动和内分泌活动的较高级神经中枢所在。下丘脑自前向后可分三部﹐即前部（又名视前区和视上区）﹑中部（结节区）和后部（乳头体区）。下丘脑具有许多细胞核团和纤维束﹐与中枢神经系统的其它部位具有密切的相互联系。它不仅通过神经和血管途径调节脑垂体前﹑后叶激素的分泌和释放﹐而且还参与调节自主神经系统﹐如控制水盐代谢﹑调节体温﹑摄食﹑睡眠﹑生殖、内脏活动以及情绪等。下丘脑神经元与来自其他部位的神经纤维有广泛的突触联系，可以接受很多神经冲动，为内分泌系统和神经系统的中心。它们能调节垂体前叶功能，合成神经垂体激素及控制自主神经和植物神经功能。故提取下丘脑神经元进行体外培养，建立下丘脑神经元体外实验平台具有重要意义。
产品属性
产品名称 兔下丘脑神经元细胞
组织来源 脑组织
默认种属 新西兰大白兔，其他咨询
产品规格 5×10^5Cells/T25
包被条件： PLL（0.1 mg/mL）
培养基： 兔下丘脑神经元细胞完全培养基(基础培养基，含B-27 Supplement、Penicillin、Streptomycin等)
换液频率： 每2-3天换液一次
生长特性： 贴壁
细胞形态： 神经元细胞样
传代比例： 不传代
传代特性： 属于终末分化细胞；属于不增殖细胞群
消化液： 0.25%胰蛋白酶
兔下丘脑神经元细胞体外培养周期有限；建议使用配套的专用生长培养基及正确的操作方法来培养，以此保证该细胞的最佳培养状态。
质量检测
实验室分离的兔下丘脑神经元细胞经β-Tubulin-Ⅲ免疫荧光鉴定，纯度可达90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。
方法简介
实验室分离的兔下丘脑神经元细胞采用胰蛋白酶消化法结合神经元专用培养基培养、化学试剂抑制法筛选制备而来，细胞总量约为5×10⁵ cells/瓶。
操作步骤
步骤一：脑组织无菌取材与修剪 无菌低温环境下快速摘取兔下丘脑新鲜脑组织，立即放入预冷无菌DMEM基础培养基中，冲洗表面血迹与杂质，仔细剔除脑膜、血管及坏死组织，精准分离纯净下丘脑神经组织，快速修剪为1mm³细小组织碎块，全程低温操作防止神经元细胞凋亡。
步骤二：温和酶解消化组织 向神经组织碎块中加入预热的0.25%胰蛋白酶-EDTA消化液，完全浸没组织，置于37℃水浴消化8分钟，期间每隔3分钟轻柔摇晃一次，促进组织解离。消化结束后立即加入含血清完全培养基终止消化，保护脆弱神经元结构。
步骤三：过滤离心获取单细胞 消化后的混合组织液经200目无菌细胞筛过滤，去除未消化组织残渣，收集纯净细胞悬液。1000rpm低速离心5分钟，弃上清，保留神经元细胞沉淀，用无菌PBS轻柔洗涤2次，清除消化液残留与杂质。
步骤四：细胞重悬与杂质去除 加入下丘脑神经元专用完全培养基，轻柔缓慢吹打细胞沉淀，避免暴力吹打损伤神经突触，制备均匀单细胞悬液，静置2分钟沉降微量团聚杂质，吸取上层纯净细胞悬液备用。
步骤五：活细胞计数与密度校准 取样计数活神经元细胞，严格剔除死细胞与杂质干扰，根据神经元低密度生长、突触分化特性，将细胞悬液浓度精准调整至4×10⁵个/mL，避免密度过高导致细胞相互抑制凋亡。
步骤六：精准接种铺板 将细胞悬液匀速接种至提前包被多聚赖氨酸的无菌培养板中，轻轻晃动培养板使细胞均匀分布，为神经元突触伸展、网络构建提供均匀生长环境，标注细胞样本与接种信息。
步骤七：静置分化培养与养护 置于37℃、5%CO₂饱和湿度培养箱避光静置培养48小时，全程禁止晃动移动，保障细胞贴壁与初始突触生长。48小时后首次半量换液，后续每3天半量更换新鲜培养基，每日观察神经元形态、突触延伸与网络形成状态。
