兔下腔静脉内皮细胞分离自下腔静脉组织;下腔静脉是体内最大的静脉,收集下肢、盆部和腹部的静脉血。下腔静脉由左、右髂总静脉汇合而成,汇合部位多在第5腰椎水平,少数平第4腰椎。下腔静脉位于脊柱的右前方,沿腹主动脉的右侧上行,经肝的腔静脉沟、穿 膈的腔静脉孔,开口于右心房。下腔静脉的前面有肝、胰头、十二指肠水平部、右睾丸动脉及小肠系膜根越过。后面为有膈脚、第1-4腰椎、有腰交感干和腹主动脉的壁支。右侧与 腰大肌、右肾、右肾上腺相邻,左侧为腹主动脉。下腔静脉的属支有髂总静脉、右睾丸静脉、肾静脉、右肾上腺静脉、肝静脉、膈下静脉和腰静脉,其中大部分 属支与同名动脉伴行。
产品属性
产品名称 兔下腔静脉内皮细胞
组织来源 下腔静脉组织
默认种属 新西兰大白兔,其他咨询
产品规格 5×10^5Cells/T25
包被条件: PLL(0.1 mg/mL)或明胶(0.1%)
培养基: 兔下腔静脉内皮细胞完全培养基(含FBS、生长添加剂、Penicillin、Streptomycin等)
换液频率: 每2-3天换液一次
生长特性: 贴壁
细胞形态: 内皮细胞样
传代比例: 1:2
传代特性: 可传2-3代
消化液: 0.25%胰蛋白酶
兔下腔静脉内皮细胞体外培养周期有限;建议使用配套的专用生长培养基及正确的操作方法来培养,以此保证该细胞的最佳培养状态。
质量检测
实验室分离的兔下腔静脉内皮细胞经CD31免疫荧光鉴定,纯度可达90%以上,且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。
方法简介
实验室分离的兔下腔静脉内皮细胞采用胰蛋白酶-胶原酶联合消化法结合差速贴壁法、并通过内皮细胞专用培养基培养筛选制备而来,细胞总量约为5×10⁵ cells/瓶。
操作步骤
步骤一:血管组织无菌取材清洗 无菌条件下快速摘取兔新鲜下腔静脉血管组织,立即放入预冷无菌PBS缓冲液中,反复冲洗血管内腔与外壁,彻底清除血液残留、血栓与杂质,剔除血管周围附着的脂肪、结缔组织,保留纯净血管管壁组织,全程低温无菌保护内皮细胞活性。
步骤二:血管内壁细胞消化解离 将处理干净的血管组织纵向剪开,内皮细胞面朝上平铺于无菌培养皿中,加入预热的0.1%Ⅱ型胶原酶消化液,完全覆盖血管内壁,37℃恒温避光消化10分钟,轻柔晃动培养皿,促进消化液充分作用于内皮细胞与管壁连接组织。
步骤三:细胞收集与终止消化 消化完成后,立即加入含血清内皮细胞专用完全培养基终止酶活性,用无菌移液枪轻柔反复吹打血管内壁,使脱落的内皮细胞充分分散,收集全部细胞混合液,转移至无菌离心管中。
步骤四:离心洗涤纯化细胞 将细胞混合液1000rpm离心5分钟,弃去上清消化液与杂质,保留细胞沉淀。加入无菌预热PBS轻柔重悬,同等参数离心洗涤2次,彻底清除残留消化酶、组织碎片,纯化内皮细胞样本。
步骤五:活性计数与浓度调整 用专用完全培养基重悬细胞沉淀,制备单细胞悬液,台盼蓝染色计数活细胞,精准统计细胞存活率,将细胞悬液浓度调整至7×10⁵个/mL,适配血管内皮细胞贴壁生长、形成血管样结构的培养需求。
步骤六:均匀接种贴壁培养 将调好浓度的细胞悬液接种至提前包被明胶的无菌培养皿中,轻轻十字晃动培养皿,使细胞均匀贴壁分布,避免局部疏密不均。清晰标注细胞信息、接种时间与培养条件。
步骤七:恒温养护与形态监测 放入37℃、5%CO₂饱和湿度培养箱静置培养24小时,待细胞完全贴壁伸展后更换新鲜培养基,后续每48小时换液一次。每日显微镜观察内皮细胞多边形形态、紧密连接状态,及时排查污染与细胞凋亡异常。
