兔外周血巨噬细胞分离自外周血；外周血是除骨髓之外的血液，临床上常用一些方法把骨髓中的造血干细胞释放到血液中，再在从血液中提取分离得到造血干细胞，我们把这样得到的干细胞称为外周血干细胞，在二十一世纪初人类开始的生命方舟计划中首次提出外周血这一新概念。巨噬细胞属免疫细胞，有多种功能，是研究细胞吞噬、细胞免疫和分子免疫学的重要对象。巨噬细胞较易获得，便于培养，并可进行纯化。巨噬细胞属不繁殖细胞群，在条件适宜下可生活2-3周，多用做原代培养，难以长期生存。巨噬细胞（Macrophages）是一种位于组织内的白血球，源自单核细胞，而单核细胞又来源于骨髓中的前体细胞。巨噬细胞和单核细胞皆为吞噬细胞，在脊椎动物体内参与非特异性防卫（先天性免疫）和特异性防卫（细胞免疫）。它们的主要功能是以固定细胞或游离细胞的形式对细胞残片及病原体进行噬菌作用（即吞噬以及消化），并激活淋巴球或其他免疫细胞，令其对病原体作出反应。
产品属性
产品名称 兔外周血巨噬细胞
组织来源 外周血
默认种属 新西兰大白兔，其他咨询
产品规格 5×10^5Cells/T25
培养基： 兔外周血巨噬细胞完全培养基(含FBS、生长添加剂、Penicillin、Streptomycin等)
换液频率： 每2-3天换液一次
生长特性： 贴壁
细胞形态： 巨噬细胞样
传代比例： 不传代
传代特性： 属于终末分化细胞；属于不增殖细胞群
消化液： 利多卡因（12 mM）
兔外周血巨噬细胞体外培养周期有限；建议使用配套的专用生长培养基及正确的操作方法来培养，以此保证该细胞的最佳培养状态。
质量检测
实验室分离的兔外周血巨噬细胞经CD68免疫荧光鉴定，纯度可达90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。
方法简介
实验室分离的兔外周血巨噬细胞采用取外周血、通过密度梯度离心法、差速贴壁、细胞因子诱导法制备而来，细胞总量约为5×10⁵ cells/瓶。
操作步骤
步骤一：无菌采血与样本稀释预处理 超净工作台紫外灭菌30分钟，备好无菌采血耗材、肝素抗凝管、无菌PBS、巨噬细胞专用分离培养基。无菌采集兔外周血，抗凝处理后轻柔颠倒混匀，防止血液凝固，将抗凝血与无菌PBS按1:1比例充分稀释，去除血液粘稠度，便于后续分离操作，全程无菌低温操作保护细胞活性。
步骤二：密度梯度离心分离单个核细胞 采用淋巴细胞分离液进行密度梯度分离，将稀释血液缓慢叠加于分离液液面，保持界面平整清晰，设置2000rpm、20分钟低速离心。离心后吸取中间白膜层单个核细胞，转移至无菌离心管，为巨噬细胞诱导培养提供基础细胞样本。
步骤三：细胞洗涤除杂与重悬 向收集的单个核细胞中加入4mL无菌PBS，轻柔吹打混匀，1500rpm离心7分钟，弃去上清液，去除残留分离液、红细胞碎片与血浆杂质。重复洗涤2次，最后用巨噬细胞专用完全培养基重悬细胞沉淀，制备均匀细胞悬液。
步骤四：贴壁筛选纯化巨噬细胞 将细胞悬液接种至无菌培养皿中，置于37℃、5%CO₂培养箱静置贴壁培养4小时，利用巨噬细胞易贴壁、淋巴细胞悬浮的特性进行纯化。培养结束后吸出上层悬浮未贴壁细胞，用预热PBS轻柔洗涤培养皿2次，彻底去除残留悬浮杂细胞，获得纯化贴壁巨噬细胞。
步骤五：细胞计数与浓度调控 加入胰酶温和消化贴壁巨噬细胞，终止消化后制备单细胞悬液，台盼蓝染色计数活细胞，精准统计细胞数量。调整细胞悬液浓度至6×10⁵个/mL，适配巨噬细胞贴壁增殖、活化培养的最佳密度。
步骤六：规范接种培养定型 将纯化后的巨噬细胞悬液接种至全新无菌培养容器中，轻轻十字晃动铺匀，保证细胞均匀贴壁生长。标注细胞批次、接种时间、培养条件，做好实验记录，避免样本混淆。
步骤七：恒温诱导养护与监测 放入恒温培养箱静置培养24小时，待细胞完全贴壁伸展后更换新鲜完全培养基，后续每48小时换液一次。每日显微镜观察巨噬细胞形态、贴壁状态与活化情况，及时清除污染、死细胞，维持稳定培养环境。
