兔外周血单个核细胞分离自外周血；外周血是除骨髓之外的血液，临床上常用一些方法把骨髓中的造血干细胞释放到血液中，再在从血液中提取分离得到造血干细胞，我们把这样得到的干细胞称为外周血干细胞，在二十一世纪初人类开始的生命方舟计划中首次提出外周血这一新概念。外周血单个核细胞（PBMC）即外周血中具有单个核的细胞，包括淋巴细胞和单核细胞。目前，主要的分离方法是密度梯度离心法，因为血液中各有形成分的比重存在差异，因此得以分离出不同的细胞。
产品属性
产品名称 兔外周血单个核细胞
简称 PBMCs;PBMC
组织来源 血液组织
默认种属 新西兰大白兔，其他咨询
产品规格 5×10^5Cells/T25
培养基： 兔外周血单个核细胞完全培养基(含FBS、生长添加剂、Penicillin、Streptomycin等)
换液频率： 每2-3天换液一次
生长特性： 悬浮
细胞形态： 圆形
传代比例： 不传代
传代特性： 不增殖；不传代
消化液： 0.25%胰蛋白酶
兔外周血单个核细胞体外培养周期有限；建议使用配套的专用生长培养基及正确的操作方法来培养，以此保证该细胞的最佳培养状态。
质量检测
实验室分离的兔外周血单个核细胞，不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。
方法简介
实验室分离的兔外周血单个核细胞采用取外周血、通过密度梯度离心法制备而来，细胞总量约为5×10⁵ cells/瓶。
操作步骤
步骤一：无菌样本制备与试剂准备 超净台提前紫外灭菌30分钟，备好无菌抗凝管、PBS缓冲液、人/兔专用淋巴细胞分离液、单个核细胞专用培养基。无菌采集兔外周血，肝素抗凝后轻柔混匀，避免溶血，将抗凝血与无菌PBS1:1稀释，充分吹打均匀，保证样本无血凝块、无杂质。
步骤二：精准密度梯度离心分层 取无菌离心管，先加入淋巴细胞分离液，再将稀释血液样本缓慢平铺于分离液上层，严格保持液层清晰，避免冲击混合。设置离心参数2200rpm、20分钟，低速升降速，离心后液体分为四层，第二层云雾状白膜层即为外周血单个核细胞，包含淋巴细胞、单核细胞。
步骤三：目标细胞提取收集 平稳取出离心管，杜绝震荡分层，用无菌移液枪精准吸取中间白膜层细胞，转移至新的无菌15mL离心管中，全程轻柔操作，减少细胞破损。避免吸取上层血浆与下层红细胞、粒细胞杂质，最大程度提升单个核细胞纯度。
步骤四：多次洗涤纯化细胞 向收集的细胞中加入5mL无菌预热PBS缓冲液，轻柔吹打混匀，1800rpm离心6分钟，弃上清去除残留分离液与杂质。重复PBS洗涤2次，彻底清除杂细胞、蛋白残留，获得高纯度单个核细胞沉淀。
步骤五：活性检测与浓度校准 用少量单个核细胞专用完全培养基重悬细胞沉淀，台盼蓝染色后显微镜下计数活细胞，统计细胞存活率，剔除死细胞干扰。将细胞悬液浓度精准调整至7×10⁵个/mL，适配单个核细胞悬浮生长特性。
步骤六：悬浮接种铺板处理 将校准浓度的细胞悬液均匀接种至无菌培养板/培养瓶中，轻轻晃动培养容器，使细胞均匀悬浮分布，无局部聚集。清晰标注细胞名称、样本来源、接种日期等关键信息，规范实验操作记录。
步骤七：恒温培养与动态养护 置于37℃、5%CO₂饱和湿度培养箱中静置悬浮培养，12小时后首次观察细胞状态，更换半量新鲜培养基，去除死细胞。后续每日观察细胞活性、形态变化，每24小时半量换液，维持培养基营养稳定，保障细胞正常存活增殖。
