兔外周血白细胞分离自外周血；外周血是除骨髓之外的血液，临床上常用一些方法把骨髓中的造血干细胞释放到血液中，再在从血液中提取分离得到造血干细胞，我们把这样得到的干细胞称为外周血干细胞，在二十一世纪初人类开始的生命方舟计划中首次提出外周血这一新概念。白细胞是一类无色、球形、有核的血细胞。白细胞不是一个均一的细胞群，根据其形态、功能和来源部位可以分为三大类：粒细胞、单核细胞和淋巴细胞，其中粒细胞又可根据胞质中颗粒的染色性质不同，分为中性粒细胞、嗜酸粒细胞和嗜碱粒细胞三种。根据白细胞的细胞质内有无特殊颗粒，可将其分为有粒白细胞和无粒白细胞。前者常简称为粒细胞，根据其特殊颗粒的染色特性，又分为中性粒细胞、嗜碱性粒细胞和嗜酸性粒细胞，白细胞也通常被称为免疫细胞。在显微镜下可以看到，血细胞中体积比较大、数量比较少，具有细胞核；其主要作用是吞噬细菌、防御疾病。
产品属性
产品名称 兔外周血白细胞
简称 PBL;PWBC
组织来源 血液组织
默认种属 新西兰大白兔，其他咨询
产品规格 5×10^5Cells/T25
培养基： 兔外周血白细胞完全培养基(含FBS、生长添加剂、Penicillin、Streptomycin等)
换液频率： 每2-3天换液一次
生长特性： 悬浮
细胞形态： 圆形
传代比例： 不传代
传代特性： 不增殖；不传代
消化液： 0.25%胰蛋白酶
兔外周血白细胞体外培养周期有限；建议使用配套的专用生长培养基及正确的操作方法来培养，以此保证该细胞的最佳培养状态。
质量检测
实验室分离的兔外周血白细胞，不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。
方法简介
实验室分离的兔外周血白细胞采用取外周血、通过密度梯度离心法制备而来，细胞总量约为5×10⁵ cells/瓶。
操作步骤
步骤一：无菌采血与样本预处理 提前备好无菌采血针、抗凝离心管、PBS缓冲液、淋巴细胞分离液，超净台紫外灭菌30分钟。无菌采集兔外周静脉血，立即注入含肝素抗凝剂的无菌离心管中，轻柔颠倒混匀5-8次，防止血液凝固，全程低温无菌操作，避免白细胞活化破损。将抗凝血与无菌PBS按1:1比例稀释，充分混匀备用。
步骤二：密度梯度分层分离细胞 取无菌15mL离心管，缓慢加入适量兔淋巴细胞分离液，将稀释后的外周血样本轻柔叠加在分离液液面上方，严格保持两层液体界面清晰，无混合、浑浊现象。设置离心参数2000rpm、离心20分钟、升降速调至最低，完成密度梯度离心，离心后液体分层，中间白膜层即为外周血白细胞层。
步骤三：白细胞提取与初步洗涤 离心结束后平稳取出离心管，避免震荡分层液体，用无菌移液枪缓慢吸取中间乳白色白膜层细胞，转移至全新无菌离心管中。加入4mL无菌PBS缓冲液，轻柔吹打混匀，以1500rpm离心8分钟，弃去上清液，去除分离液残留、红细胞碎片与血浆杂质。
步骤四：细胞纯化去除杂细胞 向细胞沉淀中加入3mL预热PBS重悬细胞，再次1500rpm离心洗涤8分钟，重复洗涤2次，彻底清除残留分离液与杂细胞。洗涤完成后加入适量白细胞专用完全培养基，轻柔吹打分散细胞沉淀，制备初步细胞悬液，去除残留团聚细胞。
步骤五：活细胞计数与浓度调整 吸取少量细胞悬液，采用台盼蓝染色法鉴别活死细胞，通过血球计数板精准计数活白细胞数量。根据实验需求调整细胞悬液浓度，常规培养浓度调整至8×10⁵个/mL，保障白细胞存活稳定、活性良好，满足后续培养与实验检测需求。
步骤六：细胞接种悬浮培养 将调好浓度的白细胞悬液接种至无菌细胞培养板中，无需贴壁处理，均匀分配每孔细胞悬液体积，轻轻晃动培养板使细胞均匀悬浮分布。标注细胞样本信息、接种时间、浓度参数，做好实验溯源记录。
步骤七：恒温悬浮培养与监测 将培养板置于37℃、5%CO₂饱和湿度培养箱中悬浮培养，静置12小时后观察细胞存活状态，去除死亡漂浮细胞。后续每24小时半量更换新鲜完全培养基，每日监测细胞活性、数量变化，及时排查污染与细胞凋亡异常情况。
