兔视网膜血管周细胞分离自视网膜微血管组织；周细胞（pericyte）又称Rouget细胞和壁细胞，是一种包围全身毛细血管和静脉中内皮细胞的细胞，可以收缩。周细胞嵌入毛细血管内皮细胞的基膜中，通过物理接触和旁分泌信号与内皮细胞进行细胞通讯，监视和稳定内皮细胞的成熟过程。此外，周细胞还具有调控毛细血管血流量、细胞碎屑清除和吞噬以及血脑屏障渗透性的作用，其多功能性是目前研究的热点之一，所以对血管周细胞的生物学特征、标记物、细胞功能等的研究都为相关研究提供基础资料。周细胞产生手指状的外延以调控毛细血管的血流量。周细胞和内皮细胞之间共同拥有一个基膜，基膜上有多种细胞连接，包括多种整合素、神经钙黏素、纤连蛋白以及接合素。它还参与毛细血管直径的双向调控；毛细血管受损时，周细胞还可增殖，分化为内皮细胞和成纤维细胞。
产品属性
产品名称 兔视网膜微血管周细胞
组织来源 视网膜组织
默认种属 新西兰大白兔，其他咨询
产品规格 5×10^5Cells/T25
培养基： 兔视网膜微血管周细胞完全培养基(基础培养基，含FBS、EGF、bFGF、Insulin、Penicillin、Streptomycin等)
换液频率： 每2-3天换液一次
生长特性： 贴壁
细胞形态： 成纤维细胞样
传代比例： 1:2
传代特性： 可传3代左右
消化液： 0.25%胰蛋白酶
兔视网膜微血管周细胞体外培养周期有限；建议使用配套的专用生长培养基及正确的操作方法来培养，以此保证该细胞的最佳培养状态。
质量检测
实验室分离的兔视网膜微血管周细胞经α-SMA免疫荧光鉴定，纯度可达90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。
方法简介
实验室分离的兔视网膜血管周细胞采用胶原酶-中性蛋白酶联合消化法及不锈钢网筛过滤法制备而来，细胞总量约为5×10⁵ cells/瓶。
操作步骤
步骤一：无菌预处理与试剂适配准备 提前开启超净台紫外灭菌30分钟，调试CO₂培养箱至37℃、5%CO₂、饱和湿度恒定参数。将视网膜微血管周细胞专用完全培养基、无菌PBS、0.1%胶原酶-胰酶复合消化液、细胞洗涤液37℃预热，准备无菌培养瓶、离心管、200目细胞筛、无菌镊子等耗材，台面与手部乙醇消毒，全程保持无菌无尘环境，适配微血管周细胞的脆弱生长特性。
步骤二：细胞快速复苏与无菌转移 从液氮罐取出细胞冻存管，迅速置于37℃水浴快速晃动解冻，严控解冻时长，残留微量冰晶即刻取出，防止高温损伤微血管细胞结构。外壁乙醇消毒后移入超净台，缓慢将细胞悬液移入含4mL预热完全培养基的15mL离心管，轻柔吹打混匀，稀释冻存液毒性，保护周细胞活性。
步骤三：低速离心纯化细胞 混匀后的细胞悬液以900rpm低速离心5分钟，适配周细胞细小、易破损的特性，避免高速离心造成细胞损伤。离心后弃上清，保留管底致密细胞沉淀，加入3mL无菌PBS轻柔重悬，再次同等参数离心洗涤，重复2次，彻底清除DMSO、细胞碎片与冻存杂质，纯化细胞样本。
步骤四：温和消化分散细胞 弃除PBS洗涤液，加入1mL预热的胶原酶-胰酶复合消化液，轻轻摇匀后置于37℃培养箱消化3分钟，期间每隔1分钟轻弹管底，促进细胞团聚体松散。观察细胞完全分散后，立即加入2mL含血清完全培养基终止消化，充分中和消化酶活性，避免过度消化导致周细胞凋亡、结构破损。
步骤五：精准计数与浓度校准 吹打制备均匀单细胞悬液，取样进行血球计数板计数，剔除死细胞与杂质计数干扰，精准统计活细胞数量。根据微血管周细胞生长规律，将细胞悬液浓度调整至6×10⁵个/mL，该浓度可保障细胞均匀贴壁、微血管结构正常分化，维持细胞增殖稳态。
步骤六：规范接种与铺板定型 取无菌T25培养瓶，加入少量完全培养基润洗瓶底后弃液，将调好浓度的细胞悬液匀速接种至培养瓶内，轻轻十字摇晃培养瓶，使细胞均匀铺展于瓶底，无局部堆积、空白区域。清晰标注细胞种类、接种时间、批次信息，做好实验记录备案。
步骤七：恒温培养与周期养护 将培养瓶平稳放入恒温培养箱，静置培养24小时不移动，保障细胞牢固贴壁。24小时后更换新鲜完全培养基，去除漂浮死细胞与杂质，后续每48小时换液一次，每日显微镜观察细胞形态、增殖状态，及时监测细胞纯度与生长速度，杜绝污染与生长异常。
