兔脐静脉内皮细胞分离自脐带组织;它是脐静脉的重要结构组成细胞之一,在机体的正常生理过程中发挥着重要作用。脐带是哺乳类的连接胎儿和胎盘的管状结构,脐带中通过尿膜的血管即脐动脉和脐静脉,卵黄囊的血管即脐肠系膜动脉及脐肠系膜静脉。在子宫中,子宫动脉在胎盘的母体部分出的毛细血管,与胎盘的子体部胎儿毛细血管靠近,在此处母体和胎儿的血液间进行CO₂和O₂,代谢产物即代谢废物和营养物质的交换。脐动脉将胎儿产生的废物运送至胎盘,脐静脉将O₂和营养物质从胎盘运送给胎儿。
产品属性
产品名称 兔脐静脉内皮细胞
简称 UVECs
组织来源 脐带组织
默认种属 新西兰大白兔,其他咨询
产品规格 5×10^5Cells/T25
包被条件: PLL(0.1 mg/mL)或明胶(0.1%)
培养基: 兔脐静脉内皮细胞完全培养基(含FBS、生长添加剂、Penicillin、Streptomycin等)
换液频率: 每2-3天换液一次
生长特性: 贴壁
细胞形态: 内皮细胞样
传代比例: 1:2
传代特性: 可传5代左右;3代以内状态最佳
消化液: 0.25%胰蛋白酶
兔脐静脉内皮细胞体外培养周期有限;建议使用配套的专用生长培养基及正确的操作方法来培养,以此保证该细胞的最佳培养状态。
质量检测
实验室分离的兔脐静脉内皮细胞经CD31免疫荧光鉴定,纯度可达90%以上,且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。
方法简介
实验室分离的兔脐静脉内皮细胞采用胰蛋白酶-胶原酶联合消化法结合差速贴壁法、并通过内皮细胞专用培养基培养筛选制备而来,细胞总量约为5×10⁵ cells/瓶。
操作步骤
步骤一:内皮细胞无菌精细准备 深度消杀超净台,所有耗材无菌无杂质,提前预热脐静脉内皮专用培养基、无菌PBS、温和胶原酶消化液,准备包被培养瓶与精细细胞筛,全程轻柔无菌操作,保护内皮细胞活性。
步骤二:兔脐静脉组织精准分离 无菌摘取兔脐带,在体视显微镜下分离纯净脐静脉血管,剔除脐动脉、脐带间质及外膜杂质组织,纵向剪开血管,暴露内膜内皮层,预冷PBS漂洗洁净。
步骤三:内膜组织预处理净化 将脐静脉内膜组织剪成细小片段,移入无菌离心管,PBS温和漂洗3次,清除内腔残留血细胞、黏液杂质,彻底净化内膜组织样本。
步骤四:温和特异性酶解消化 加入预热胶原酶消化液,37℃水浴避光温和消化16-18min,每3min轻微晃动一次,精准解离脐静脉内皮细胞,不损伤基底组织。
步骤五:终止消化与精细过滤 加入内皮专用培养基快速终止消化,轻柔吹打内膜组织洗脱细胞,200目细胞筛过滤,去除组织残片,收集纯净脐静脉内皮细胞悬液。
步骤六:低速离心与活性重悬 800r/min低速离心8min,低损伤富集细胞,吸弃上清后加入新鲜预热培养基,轻柔吹打重悬,制备均匀单细胞悬液。
步骤七:接种贴壁与形态培养 将细胞悬液接种于包被培养瓶,补足培养基静置,放入37℃、5%CO₂培养箱培养。48h禁止移动,待细胞贴壁伸展后,每2天换液,观察典型内皮铺路石样形态。
