兔脐动脉平滑肌细胞分离自脐带组织;它是脐动脉的重要结构组成细胞之一,在机体的正常生理过程中发挥着重要作用。脐带是哺乳类的连接胎儿和胎盘的管状结构,脐带中通过尿膜的血管即脐动脉和脐静脉,卵黄囊的血管即脐肠系膜动脉及脐肠系膜静脉。在子宫中,子宫动脉在胎盘的母体部分出的毛细血管,与胎盘的子体部胎儿毛细血管靠近,在此处母体和胎儿的血液间进行CO₂和O₂,代谢产物即代谢废物和营养物质的交换。脐动脉将胎儿产生的废物运送至胎盘,脐静脉将O₂和营养物质从胎盘运送给胎儿。由于脐带是分娩过程中的废弃物,同时从脐带中分离脐静动平滑肌细胞方法相对成熟,使得体外培养的脐动脉平滑肌细胞作为研究血管的模型细胞。脐动脉平滑肌细胞原代分离培养3天后,可见细胞贴壁伸展,细胞形态大小不一,呈梭形、不规则形、三角形或扇形,核卵圆形、居中;2周后细胞汇合,多数细胞伸展呈长梭形,胞浆丰富,有分枝状突起,细胞平行排列成单层或部分区域多层重叠生长,高低起伏;细胞密度低时,常交织成网状;密度高时,则排列为旋涡状或栅栏状。传代后细胞生长较快,4-6天即可汇合,并保持上述形态学特征和生长特点。
产品属性
产品名称 兔脐动脉平滑肌细胞
简称 UASMCs
组织来源 脐带组织
默认种属 新西兰大白兔,其他咨询
产品规格 5×10^5cells/T25
培养基: 兔脐动脉平滑肌细胞完全培养基(基础培养基,含FBS、EGF、bFGF、Insulin、Penicillin、Streptomycin等)
换液频率: 每2-3天换液一次
生长特性: 贴壁
细胞形态: 成纤维细胞样
传代比例: 1:2
传代特性: 可传3代左右
消化液: 0.25%胰蛋白酶
兔脐动脉平滑肌细胞体外培养周期有限;建议使用配套的专用生长培养基及正确的操作方法来培养,以此保证该细胞的最佳培养状态。
质量检测
实验室分离的兔脐动脉平滑肌细胞经α-SMA免疫荧光鉴定,纯度可达90%以上,且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。
方法简介
实验室分离的兔脐动脉平滑肌细胞采用胰蛋白酶-胶原酶联合消化法结合差速贴壁法制备而来,细胞总量约为5×10⁵ cells/瓶。
操作步骤
步骤一:标准化无菌术前准备 全面消杀实验台面与器具,耗材无菌烘干备用。预热脐动脉平滑肌专用培养基、无菌PBS、0.125%胰酶消化液,校准细胞培养箱参数,搭建无菌、恒温、洁净的实验操作环境。
步骤二:脐动脉平滑肌组织取材 无菌分离兔脐动脉血管,剔除血管内膜内皮组织、外膜结缔组织与脂肪组织,精准保留血管中膜平滑肌层组织,预冷PBS反复漂洗,清除血污与杂质,纯化靶组织。
步骤三:剪切组织与多次净化 将平滑肌组织剪碎至1mm³细小组织块,移入离心管,PBS轻柔吹打漂洗3次,静置弃上清,彻底清除组织间隙血细胞与碎屑,保证样本纯净。
步骤四:恒温胰酶充分消化 加入预热胰酶消化液,37℃水浴消化22min,每5min混匀一次,充分降解平滑肌细胞间连接结构,促使细胞高效解离。
步骤五:终止消化与过滤除杂 消化完成后加入完全培养基终止反应,轻柔吹打释放细胞。100目细胞筛过滤混合液,截留组织残块,收集纯净脐动脉平滑肌细胞悬液。
步骤六:离心富集与细胞重悬 1000r/min室温离心10min,富集细胞沉淀,吸弃上清废液,加入2mL预热专用培养基,轻柔吹打重悬,分散细胞团块。
步骤七:接种与常规稳态培养 细胞悬液接种至培养瓶,补足培养基摇匀,放入37℃、5%CO₂培养箱静置培养。24h贴壁稳定,每48h更换新鲜培养基,观察细胞梭形增殖形态。
