兔脐动脉内皮细胞分离自脐带组织;它是脐动脉的重要结构组成细胞之一,在机体的正常生理过程中发挥着重要作用。脐带是哺乳类的连接胎儿和胎盘的管状结构,脐带中通过尿膜的血管即脐动脉和脐静脉,卵黄囊的血管即脐肠系膜动脉及脐肠系膜静脉。在子宫中,子宫动脉在胎盘的母体部分出的毛细血管,与胎盘的子体部胎儿毛细血管靠近,在此处母体和胎儿的血液间进行CO₂和O₂,代谢产物即代谢废物和营养物质的交换。脐动脉将胎儿产生的废物运送至胎盘,脐静脉将O₂和营养物质从胎盘运送给胎儿。
产品属性
产品名称 兔脐动脉内皮细胞
组织来源 脐带组织
默认种属 新西兰大白兔,其他咨询
产品规格 5×10^5cells/T25
包被条件: PLL(0.1 mg/mL)或明胶(0.1%)
培养基: 兔脐动脉内皮细胞完全培养基(含FBS、生长添加剂、Penicillin、Streptomycin等)
换液频率: 每2-3天换液一次
生长特性: 贴壁
细胞形态: 内皮细胞样
传代比例: 1:2
传代特性: 可传2-3代
消化液: 0.25%胰蛋白酶
兔脐动脉内皮细胞体外培养周期有限;建议使用配套的专用生长培养基及正确的操作方法来培养,以此保证该细胞的最佳培养状态。
质量检测
实验室分离的兔脐动脉内皮细胞经CD31免疫荧光鉴定,纯度可达90%以上,且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。
方法简介
实验室分离的兔脐动脉内皮细胞采用胰蛋白酶-胶原酶联合消化法结合差速贴壁法、并通过内皮细胞专用培养基培养筛选制备而来,细胞总量约为5×10⁵ cells/瓶。
操作步骤
步骤一:内皮细胞无菌实验准备 提前完成超净台无菌消杀,耗材高压灭菌烘干。预热脐动脉内皮专用培养基、无菌PBS、0.1%胶原酶温和消化液,准备明胶包被培养瓶、精细细胞筛,全程温和无菌操作,保护脆弱内皮细胞。
步骤二:兔脐动脉组织分离取材 无菌取兔脐带组织,在体视显微镜下精准分离脐动脉血管,剔除脐带静脉、间质组织及外膜结缔组织,保留完整纯净的脐动脉血管,预冷PBS反复漂洗去除血污与杂质。
步骤三:组织预处理与净化漂洗 将脐动脉血管纵向剪开,暴露血管内膜内皮层面,剪成1cm左右小段,移入离心管,PBS轻柔漂洗3次,清除血管内腔残留血细胞与杂质,纯化内膜组织。
步骤四:内膜温和酶解消化 加入预热胶原酶消化液,浸没血管内膜组织,37℃水浴温和消化18min,每4min轻柔晃动一次,特异性解离血管内膜内皮细胞,避免损伤血管肌层组织。
步骤五:终止消化与细胞过滤 立即加入内皮专用培养基终止消化,轻柔吹打血管内壁,充分洗脱解离的内皮细胞。200目细胞筛过滤,去除组织残片,收集纯净脐动脉内皮细胞悬液。
步骤六:低速离心与轻柔重悬 800r/min低速离心8min,富集内皮细胞沉淀,吸弃上清后加入1.5mL预热培养基,轻柔吹打重悬,制备均匀单细胞悬液。
步骤七:接种贴壁与专属培养 细胞悬液接种于明胶包被培养瓶,补足培养基摇匀,置于37℃、5%CO₂培养箱静置培养。48h静置贴壁,每2天换液一次,观察内皮细胞多边形铺路石样形态。
