兔胚胎成纤维细胞（Rabbit Embryonic Fibroblasts, REFs）分离自胚胎组织，是从妊娠中期（通常为胚胎发育12.5-14.5天）的兔胚胎中分离获得的成纤维样间质细胞，属于贴壁生长的原代成纤维细胞，具有典型的成纤维细胞形态与生物学功能，是哺乳动物细胞生物学研究中常用的模式细胞之一。一般通过剔除胚胎的头部、内脏（如心脏、肝脏）及四肢，保留躯干部分，酶消化分离获得，典型形态为长梭形或不规则多边形（生长形态特性与成纤维细胞相似），呈贴壁生长，培养过程中易形成方向性排列，增殖能力较强（原代至P5代前增殖活跃，随传代次数增加逐渐出现衰老现象）；可分泌多种细胞因子（如白血病抑制因子LIF、成纤维细胞生长因子FGF）、extracellularmatrix（ECM）成分（如胶原蛋白、纤连蛋白），为其他细胞生长提供微环境支持，能产生抑制ES细胞自主分化和促进ES细胞增殖的因子，故能有效地促进ES细胞的增殖并维持其未分化特性和多潜能性，且分泌效果优于外源添加的一些因子；表达成纤维细胞特异性标志物（如波形蛋白Vimentin），不表达上皮细胞标志物（如角蛋白Cytokeratin）；可用于干细胞培养支持，作为胚胎干细胞（ESCs）、诱导多能干细胞（iPSCs）的饲养层细胞，通过分泌LIF维持干细胞的未分化状态与自我更新能力；体外研究模型，用于研究成纤维细胞功能（如ECM合成、细胞迁移）、胚胎发育机制、纤维化疾病（如肺纤维化、肝纤维化）的病理过程，以及药物对间质细胞的作用效果；细胞衰老研究，REFs随传代自然衰老的特性，可用于探索细胞衰老的分子机制（如端粒缩短、氧化应激影响）及抗衰老药物筛选；支持其他细胞培养，制备REFs条件培养基（培养REFs的上清液），为难以培养的细胞（如生殖细胞、神经细胞）提供生长所需的营养因子，或作为3D细胞培养的支架细胞构建类器官模型。不同种属的胚胎成纤维细胞，在基础形态、贴壁生长特性、核心分泌功能及常规培养条件上高度一致，但是存在种属差异性，如细胞体积大小、分泌因子效果、对干细胞支持能力、可传代次、药物敏感性等等，一般优选大鼠胚胎成纤维细胞作为饲养层，需要依据不同实验选择适配。
产品属性
产品名称 兔胚胎成纤维细胞
组织来源 胚胎组织
默认种属 新西兰大白兔，其他咨询
产品规格 5×10^5Cells/T25
培养基： 兔胚胎成纤维细胞完全培养基(基础培养基，含FBS、bFGF、Insulin、Penicillin、Streptomycin等)
换液频率： 每2-3天换液一次
生长特性： 贴壁
细胞形态： 成纤维细胞样
传代比例： 1:2
传代特性： 可传5代左右；3代以内状态最佳
消化液： 0.25%胰蛋白酶
兔胚胎成纤维细胞体外培养周期有限；建议使用配套的专用生长培养基及正确的操作方法来培养，以此保证该细胞的最佳培养状态。
质量检测
实验室分离的兔胚胎成纤维细胞经Vimentin免疫荧光鉴定，纯度可达90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。
方法简介
实验室分离的兔胚胎成纤维细胞采用胰蛋白酶-胶原酶混合消化法结合差速贴壁法制备而来，细胞总量约为5×10⁵ cells/瓶。
操作步骤
步骤一：高标准无菌实验筹备 针对胚胎细胞敏感性，提前40min完成实验设备、台面、耗材的全方位无菌消杀，所有器械无菌烘干。预热胚胎成纤维细胞专用完全培养基、无菌PBS、0.25%胰酶消化液，校准培养箱温湿度与CO₂浓度，搭建超洁净实验体系。
步骤二：兔胚胎全身结缔组织取材 无菌摘取兔胚胎，剔除胚胎头部、内脏、骨骼组织，仅保留胚胎躯干疏松结缔组织，该组织为胚胎成纤维细胞主要富集部位。快速用预冷PBS漂洗组织3次，清除血污与杂质，保留鲜活组织活性。
步骤三：精细剪切与多次净化 将胚胎结缔组织剪碎至0.5mm³超细小组织块，移入离心管，加入足量PBS轻柔吹打漂洗4次，每次静置弃上清，彻底去除组织碎屑、游离血细胞，高度纯化靶组织。
步骤四：恒温梯度酶解消化 加入预热胰酶消化液，37℃水浴梯度消化32min，每6min轻柔混匀一次，逐步降解胚胎组织细胞外基质，温和高效解离成纤维细胞，保护胚胎细胞固有活性。
步骤五：终止消化与过滤除杂 消化结束后加入完全培养基终止消化，轻柔吹打混匀释放细胞。100目细胞筛过滤，截留未消化组织残片，收集纯净胚胎成纤维细胞悬液。
步骤六：离心沉淀与均匀重悬 1000r/min室温离心10min，富集细胞沉淀，小心吸弃上清，加入2mL预热培养基，轻柔吹打重悬，彻底打散细胞团，制备均匀单细胞悬液。
步骤七：接种培养与增殖管护 将细胞悬液接种至培养瓶，补足培养基摇匀，放入37℃、5%CO₂恒温培养箱静置培养。24h贴壁稳定，胚胎细胞增殖速度较快，每2-3天更换新鲜培养基，及时观察细胞形态与增殖密度。
