兔脑微血管周细胞分离自脑微血管；大脑分左右两个半球，大脑皮质（灰质）覆盖着每个大脑半球的大部分，它是神经元胞体集中的地方。内部则是由神经纤维或髓鞘构成的白质。每一个半球都有三个面，即外侧面（约占整个皮质面积的1/3）、内侧面和底面（占2/3的面积）；半球表面有很多深浅不等的沟或裂，沟或裂之间的隆起叫回，它们大大增加了大脑的表面积；大脑外侧面重要的沟、裂有大脑外侧裂、顶枕裂和中央沟。由于三沟裂之界隔，使大脑皮质组分为额叶、顶叶、颞叶、枕叶四大部分。周细胞（pericyte）又称Rouget细胞和壁细胞，是一种包围全身毛细血管和静脉中内皮细胞的细胞，可以收缩。周细胞嵌入毛细血管内皮细胞的基膜中，通过物理接触和旁分泌信号与内皮细胞进行细胞通讯，监视和稳定内皮细胞的成熟过程。此外，周细胞还具有调控毛细血管血流量、细胞碎屑清除和吞噬以及血脑屏障渗透性的作用，其多功能性是目前研究的热点之一，所以对血管周细胞的生物学特征、标记物、细胞功能等的研究都为相关研究提供基础资料。周细胞产生手指状的外延以调控毛细血管的血流量。周细胞和内皮细胞之间共同拥有一个基膜，基膜上有多种细胞连接，包括多种整合素、神经钙黏素、纤连蛋白以及接合素。它还参与毛细血管直径的双向调控；毛细血管受损时，周细胞还可增殖，分化为内皮细胞和成纤维细胞。
产品属性
产品名称 兔脑微血管周细胞
组织来源 大脑组织
默认种属 新西兰大白兔，其他咨询
产品规格 5×10^5Cells/T25
包被条件： PLL（0.1 mg/mL）
培养基： 兔脑微血管周细胞完全培养基(基础培养基，含FBS、EGF、bFGF、Insulin、Penicillin、Streptomycin等)
换液频率： 每2-3天换液一次
生长特性： 贴壁
细胞形态： 成纤维细胞样
传代比例： 1:2
传代特性： 可传3-5代左右；3代以内状态最佳
消化液： 0.25%胰蛋白酶
兔脑微血管周细胞体外培养周期有限；建议使用配套的专用生长培养基及正确的操作方法来培养，以此保证该细胞的最佳培养状态。
质量检测
实验室分离的兔脑微血管周细胞经α-SMA免疫荧光鉴定，纯度可达90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。
方法简介
实验室分离的兔脑微血管周细胞采用中性蛋白酶-胶原酶联合消化法制备而来，细胞总量约为5×10⁵ cells/瓶。
操作步骤
步骤一：专项无菌实验准备 针对周细胞培养特性，提前完成超净台深度消杀，所有耗材无菌烘干。提前预热周细胞专用完全培养基、无菌PBS、0.15%胰酶-胶原酶混合消化液，准备精细细胞筛、低吸附离心管，严格把控无菌环境，适配周细胞低耐受、高纯度的培养要求。
步骤二：脑微血管组织分离取材 无菌取家兔大脑皮层组织，剔除大血管、神经及结缔组织，收集浅表微血管丰富的脑组织片段。预冷PBS反复漂洗，清除血污与杂质，保留完整微血管网络组织，全程低温快速操作，最大程度保留周细胞活性与结构完整性。
步骤三：超细剪切与组织净化 将脑组织剪切为0.5mm³以下的超细组织碎块，移入离心管加入无菌PBS，轻柔吹打漂洗3次，每次静置沉降后弃除上清杂质，彻底清除游离血细胞、破碎细胞，纯化微血管组织样本，为周细胞解离提供纯净基质。
步骤四：梯度恒温酶解解离 加入配置好的混合消化液，37℃水浴梯度消化25min，每5min轻柔颠倒混匀，逐步降解微血管管壁基质，使附着于微血管的周细胞温和解离，避免过度消化导致周细胞脱落损伤，平衡解离效率与细胞活性。
步骤五：终止消化与细胞纯化过滤 消化结束后加入完全培养基终止反应，轻柔吹打混匀，释放解离的周细胞。通过200目细胞筛过滤，去除微血管残片、内皮细胞团等杂质，收集纯净周细胞悬液，保证细胞纯度符合培养标准。
步骤六：离心富集与轻柔重悬 900r/min室温离心9min，富集周细胞沉淀，缓慢吸弃上清废液，避免触碰管底微量细胞。加入2mL预热专用培养基，轻柔吹打重悬，充分分散细胞，制备均匀单细胞悬液，无抱团、无破损细胞。
步骤七：接种贴壁与稳态培养 将细胞悬液接种至培养瓶中，补足培养基后摇匀，置于37℃、5%CO₂培养箱静置培养。24h静置贴壁，后续每48h更换新鲜培养基，定期观察周细胞增殖、贴壁形态，及时清理死细胞，维持稳定生长环境。
