兔脑微血管内皮细胞分离自脑组织；脑微血管内皮细胞是血脑屏障的主要组成成分，它是组成脑微血管腔面单层扁平上皮样细胞，能够限制可溶性物质和细胞等从血液进入大脑，大脑微血管内皮细胞与外周内皮细胞相比具有一些相同特性。它所产生和分泌的生物活性物质对维持血管张力、调节血压、抗血栓形成等有重要作用，在脑血管疾病的发病机制中有重要病理生理学意义。与外周内皮细胞相同，大脑微血管内皮细胞表面表达细胞粘附分子，调控白细胞进入大脑。由于微血管内皮细胞的器官特异性，内皮细胞通常取源于疾病研究的相关组织。其主要特征如下：①脑微血管内皮细胞存在许多细胞间紧密连接，产生很高的跨内皮阻抗，延迟细胞旁的通量；②脑微血管内皮细胞缺乏内皮细胞的窗孔结构，其液相物质胞饮水平较低；③脑微血管内皮细胞具有不对称定位酶和载体介导转运系统，从而产生“两极分化”的表现型。
产品属性
产品名称 兔脑微血管内皮细胞
简称 BMEC;BMVEC
组织来源 脑组织
默认种属 新西兰大白兔，其他咨询
产品规格 5×10^5Cells/T25
包被条件： PLL（0.1 mg/mL）或明胶（0.1%）
培养基： 兔脑微血管内皮细胞完全培养基(含FBS、生长添加剂、Penicillin、Streptomycin等)
换液频率： 每2-3天换液一次
生长特性： 贴壁
细胞形态： 内皮细胞样
传代比例： 1:2
传代特性： 可传1-2代；不建议多次传代
消化液： 0.25%胰蛋白酶
兔脑微血管内皮细胞体外培养周期有限；建议使用配套的专用生长培养基及正确的操作方法来培养，以此保证该细胞的最佳培养状态。
质量检测
实验室分离的兔脑微血管内皮细胞经CD31免疫荧光鉴定，纯度可达90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。
方法简介
实验室分离的兔脑微血管内皮细胞采用胶原酶-中性蛋白酶混合消化法结合密度梯度离心法、最后通过内皮细胞专用培养基培养筛选制备而来，细胞总量约为5×10⁵ cells/瓶。
操作步骤
步骤一：高精度无菌实验准备 脑微血管内皮细胞敏感性极强，实验前40min开启设备紫外消毒，75%酒精精细擦拭所有器具与台面，杜绝微量污染。提前预热微血管内皮专用培养基、无菌PBS、0.1%Ⅱ型胶原酶与胰酶混合消化液，准备200目、300目精细细胞筛、无菌离心管、包被培养瓶，全程严格无菌、低温预处理样本。
步骤二：脑皮层微血管组织取材 无菌摘取家兔脑组织，剥离大脑皮层灰质组织，剔除大血管、白质及结缔组织，仅保留富含微血管的皮层组织。将组织移入预冷PBS中反复漂洗，彻底清除表面血液与杂质，快速操作以维持微血管结构完整，保护内皮细胞活性。
步骤三：精细剪切与微血管纯化 将皮层组织剪碎至0.5mm³超细小碎块，无菌PBS多次漂洗，静置沉降后弃上清，去除游离血细胞与组织碎屑。通过300目细胞筛初步过滤组织悬液，截留大块组织，富集微血管片段，进一步纯化靶组织，大幅降低杂细胞污染概率。
步骤四：温和复合酶解消化 向富集的微血管组织中加入复合消化液，37℃水浴避光温和消化18-22min，每4min轻柔混匀一次，精准降解微血管基底膜与细胞外基质，使微血管内皮细胞温和解离，严格控制消化温度与时间，避免脆弱内皮细胞破损失活。
步骤五：终止消化与精细过滤 消化完成后加入专用完全培养基终止消化，轻柔吹打释放细胞。采用200目无菌细胞筛二次过滤，彻底去除微血管残片、组织杂质，收集纯净的微血管内皮细胞单细胞悬液，过滤操作缓慢轻柔，保护细胞完整性。
步骤六：低速离心与活性重悬 800r/min低速离心8min，减少细胞机械损伤，富集管底微量细胞沉淀。小心吸弃上清，加入1.5mL预热专用培养基，极轻柔吹打重悬细胞，避免产生气泡，保证细胞均匀分散、活性完好。
步骤七：低密度接种与精准培养 将细胞悬液低密度接种于明胶包被的培养瓶中，补足培养基，十字摇匀后置于37℃、5%CO₂恒温培养箱静置培养。48h禁止移动培养瓶，待细胞完全贴壁伸展后，每2天更换一次新鲜培养基，密切观察细胞形态与微血管样结构形成状态。
