兔口腔黏膜成纤维细胞分离自口腔黏膜组织;口腔(oral cavity)是消化道的起始部分。前借口裂与外界相通,后经咽峡与咽相续。口腔内有牙、舌等器官。口腔的前壁为唇、侧壁为颊、顶为腭、口腔底为黏膜和肌等结构。口腔借上、下牙弓分为前外侧部的口腔前庭(oral vestibule)和后内侧部的固有口腔(oral cavity proper);当上、下颌牙咬合时,口腔前庭与固有口腔之间可借第三磨牙后方的间隙相通。成纤维细胞(Fibroblast)是疏松结缔组织的主要细胞成分,由胚胎时期的间充质细胞分化而来。成纤维细胞较大,轮廓清楚,多为突起的纺锤形或星形的扁平状结构,其细胞核呈规则的卵圆形,核仁大而明显。成纤维细胞功能活动旺盛,细胞质嗜弱碱性,具明显的蛋白质合成和分泌活动,在一定条件下,它可以实现跟纤维细胞的互相转化;成纤维细胞对不同程度的细胞变性、坏死和组织缺损的修复有着十分重要的作用。刚分离的表皮成纤维细胞呈圆形、折光性良好,悬浮于培养基中。30 min细胞贴壁,其中部分开始伸出伪足,表现为小的突起;6 h后细胞基本贴壁完全,伸展成梭形,胞核清晰,分布较均匀,散在生长,不聚集成团;细胞生长迅速,5-7天即呈融合状态,细胞排列紧密,有的交叉重叠生长,平坦、胞体较大,细胞质透明,细胞核较大,呈椭圆形,颜色淡。细胞融合,并彼此连接成网状;细胞呈突起的纺锤形或星形的扁平分布。
产品属性
产品名称 兔口腔黏膜成纤维细胞
组织来源 口腔黏膜组织
默认种属 新西兰大白兔,其他咨询
产品规格 5×10^5Cells/T25
培养基: 兔口腔黏膜成纤维细胞完全培养基(基础培养基,含FBS、bFGF、Insulin、Penicillin、Streptomycin等)
换液频率: 每2-3天换液一次
生长特性: 贴壁
细胞形态: 成纤维细胞样
传代比例: 1:2
传代特性: 可传3代左右
消化液: 0.25%胰蛋白酶
兔口腔黏膜成纤维细胞体外培养周期有限;建议使用配套的专用生长培养基及正确的操作方法来培养,以此保证该细胞的最佳培养状态。
质量检测
实验室分离的兔口腔黏膜成纤维细胞经Vimentin免疫荧光鉴定,纯度可达90%以上,且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。
方法简介
实验室分离的兔口腔黏膜成纤维细胞采用胰蛋白酶-胶原酶混合酶消化后差速贴壁制备而来,细胞总量约为5×10⁵ cells/瓶。
操作步骤
细胞复苏融化冻存管:取出冻存细胞,37℃水浴快速融化,轻微晃动冻存管,残留微小冰晶,酒精消毒外壁,超净台转移细胞悬液至含有预热完全培养基的离心管。
离心去除冻存液:配平离心管,1000rpm 离心 5min,离心结束,缓慢吸弃上清,保留细胞沉淀。
重悬分散细胞:加入 2‑3mL 兔口腔黏膜成纤维细胞完全培养基,轻柔吹打沉淀,打散细胞团,制备单细胞悬液。
计数接种培养瓶:细胞计数,接种密度 5×10⁴‑1×10⁵cells/cm²,补全培养基,十字摇晃培养瓶,让细胞均匀铺底。
培养箱孵育贴壁:置于 37℃、5% CO₂饱和湿度培养箱静置孵育,24h 内少移动培养容器。
换液观察细胞状态:复苏 24h 显微镜观察贴壁,弃旧培养基,更换新鲜预热完全培养基,每 2‑3 天换液。
传代扩增:细胞汇合 80%‑85%,PBS 清洗细胞层,胰酶消化,镜下细胞收缩变圆,加完全培养基终止消化,收集细胞离心,分瓶传代。
