兔角膜上皮细胞分离自眼角膜组织；角膜位于眼球前壁的一层透明膜，约占纤维膜的前1/6，从后面看角膜呈正圆形，从前面看为横椭圆形。角膜厚度各部分不尽相同，中央部最薄。角膜有十分敏感的神经末梢，如有外物接触角膜，眼睑便会不由自主地合上以保护眼睛。为了保持透明，角膜并没有血管，透过外界空气、泪液及房水获取养份及氧气。角膜分为五层，由前向后依次为：上皮细胞层、前弹力层、基质层、后弹力层、内皮细胞层。其主要功能如下：①角膜是唯一的无血管的组织，具有透明的特性和合成许多蛋白的功能，分三层细胞层，外层即是上皮细胞；②角膜上皮细胞能参与先天性免疫，能感应病原体存在并发出信号从而激活角膜防御系统；③角膜上皮细胞能高效表达醛脱氢酶。角膜上皮细胞的体外培养对研究角膜的生理学、病理学、免疫学以及分子生物学都是极为重要的手段，常用于研究细胞代谢产物、病毒感染、各种生长因子和药物对细胞生长的影响。
产品属性
产品名称 兔角膜上皮细胞
简称 CECs
组织来源 角膜组织
默认种属 新西兰大白兔，其他咨询
产品规格 5×10^5Cells/T25
包被条件： 鼠尾胶原Ⅰ（2-5 μg/cm²）
培养基： 兔角膜上皮细胞完全培养基(含FBS、生长添加剂、Penicillin、Streptomycin等)
换液频率： 每2-3天换液一次
生长特性： 贴壁
细胞形态： 上皮细胞样
传代比例： 1:2
传代特性： 可传1-3代
消化液： 0.25%胰蛋白酶
兔角膜上皮细胞体外培养周期有限；建议使用配套的专用生长培养基及正确的操作方法来培养，以此保证该细胞的最佳培养状态。
质量检测
实验室分离的兔角膜上皮细胞经PCK免疫荧光鉴定，纯度可达90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。
方法简介
实验室分离的兔角膜上皮细胞采用混合胶原酶消化结合上皮细胞专用培养基培养筛选制备而来，细胞总量约为5×10⁵ cells/瓶。
操作步骤
细胞复苏解冻：取出冻存管，37℃水浴快速融化，轻微摇晃冻存管，冰晶基本消失，酒精消毒外壁，超净台转移细胞悬液至装有预热上皮细胞完全培养基的离心管。
离心去除冻存试剂：配平离心管，1000rpm 离心 5min，轻柔吸弃上清，保留底部细胞沉淀。
重悬分散细胞沉淀：加入 2‑3mL 兔角膜上皮细胞完全培养基，轻柔吹打沉淀，打散细胞团块，制备均匀悬液。
计数细胞接种：细胞计数，接种密度 6×10⁴‑1.2×10⁵cells/cm²，补加培养基，十字摇晃培养瓶，均匀铺布细胞。
培养箱静置孵育：37℃、5% CO₂饱和湿度培养箱静置孵育，24h 内尽量不移动，利于上皮细胞贴壁生长。
换液观察细胞形态：复苏 24h 显微镜观察贴壁，弃旧培养基，更换新鲜预热完全培养基，每 2‑3 天换液，观察上皮多边形形态。
细胞传代扩增：细胞汇合 80%‑85%，PBS 清洗细胞层，胰酶消化，镜下细胞收缩变圆，立刻加完全培养基终止消化，收集细胞离心，分瓶传代。
