兔角膜成纤维细胞分离自眼角膜组织；角膜位于眼球前壁的一层透明膜，约占纤维膜的前1/6，从后面看角膜呈正圆形，从前面看为横椭圆形。角膜厚度各部分不尽相同，中央部最薄。角膜有十分敏感的神经末梢，如有外物接触角膜，眼睑便会不由自主地合上以保护眼睛。为了保持透明，角膜并没有血管，透过外界空气、泪液及房水获取养份及氧气。角膜分为五层，由前向后依次为：上皮细胞层、前弹力层、基质层、后弹力层、内皮细胞层。成纤维细胞（Fibroblast）是疏松结缔组织的主要细胞成分，由胚胎时期的间充质细胞分化而来。成纤维细胞较大，轮廓清楚，多为突起的纺锤形或星形的扁平状结构，其细胞核呈规则的卵圆形，核仁大而明显。成纤维细胞功能活动旺盛，细胞质嗜弱碱性，具明显的蛋白质合成和分泌活动，在一定条件下，它可以实现跟纤维细胞的互相转化；成纤维细胞对不同程度的细胞变性、坏死和组织缺损的修复有着十分重要的作用。刚分离的角膜成纤维细胞呈圆形、折光性良好，悬浮于培养基中。30 min细胞贴壁，其中部分开始伸出伪足，表现为小的突起；6 h后细胞基本贴壁完全，伸展成梭形，胞核清晰，分布较均匀，散在生长，不聚集成团；细胞生长迅速，5-7天即呈融合状态，细胞排列紧密，有的交叉重叠生长，平坦、胞体较大，细胞质透明，细胞核较大，呈椭圆形，颜色淡。细胞融合，并彼此连接成网状；细胞呈突起的纺锤形或星形的扁平分布。角膜成纤维细胞在生理条件下的主要功能包括：构造和维持角膜的正常形态，合成和释放细胞外基质以及组织损伤后及时大量聚集修复损伤组织。
产品属性
产品名称 兔角膜成纤维细胞
组织来源 眼角膜组织
默认种属 新西兰大白兔，其他咨询
产品规格 5×10^5Cells/T25
培养基： 兔角膜成纤维细胞完全培养基(基础培养基，含FBS、bFGF、Insulin、Penicillin、Streptomycin等)
换液频率： 每2-3天换液一次
生长特性： 贴壁
细胞形态： 成纤维细胞样
传代比例： 1:2
传代特性： 可传5代左右；3代以内状态最佳
消化液： 0.25%胰蛋白酶
兔角膜成纤维细胞体外培养周期有限；建议使用配套的专用生长培养基及正确的操作方法来培养，以此保证该细胞的最佳培养状态。
质量检测
实验室分离的兔角膜成纤维细胞经Vimentin免疫荧光鉴定，纯度可达90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。
方法简介
实验室分离的兔角膜成纤维细胞采用胰蛋白酶-胶原酶混合消化法结合差速贴壁法制备而来，细胞总量约为5×10⁵ cells/瓶。
操作步骤
细胞冻存复苏：取出冻存管，37℃水浴快速融化冻存细胞，轻微晃动冻存管，残留微小冰晶，酒精消毒外壁，移入超净台，转移细胞悬液至含有预热完全培养基的离心管。
离心去除冻存液：配平离心管，1000rpm 离心 5min，离心结束，缓慢吸弃上清液，保留管底细胞沉淀。
重悬细胞沉淀：加入 2‑3mL 兔角膜成纤维细胞完全培养基，轻柔反复吹打管底沉淀，打散细胞团，制备单细胞悬液。
计数接种铺瓶：细胞计数，接种密度 5×10⁴‑1×10⁵cells/cm²，补全培养基，十字摇晃培养瓶，均匀分布细胞。
恒温孵育贴壁：放置 37℃、5% CO₂饱和湿度培养箱静置孵育，前 24h 减少移动，利于细胞贴壁伸展。
换液清除死细胞：复苏 24h 显微镜观察贴壁情况，弃旧培养基，更换新鲜预热完全培养基，每 2‑3 天换液。
细胞传代处理：细胞汇合 80%‑85%，PBS 清洗细胞，胰酶消化，镜下细胞收缩变圆，加培养基终止消化，收集细胞离心，分瓶传代扩增。
