兔肌腱干细胞分离自肌腱组织;肌腱是肌腹两端的索状或膜状致密结缔组织,便于肌肉附着和固定。一块肌肉的肌腱分附在两块或两块以上的不同骨上,是由于肌腱的牵引作用才能使肌肉的收缩带动不同骨的运动。每一块骨骼肌都分成肌腹和肌腱两部分,肌腹由肌纤维构成,色红质软,有收缩能力,肌腱由致密结缔组织构成,色乳白较硬,没有收缩能力。肌腱把骨骼肌附着于骨骼。长肌的肌腱多呈圆索状,阔肌的肌腱阔而薄,呈膜状,又叫腱膜。此处的肌腹即为通常所说的红肌,而肌腱即为白肌,分别控制肌肉的力量、爆发力和耐力。肌腱干细胞(TSCs)是一种来源于肌腱组织的间充质干细胞,其具有多向分化潜能,并且在外源性前列腺素E2作用下异常分化。体外培养时该细胞群具有克隆形成能力、自我更新及多向分化潜能等干细胞的普遍特性。肌腱干细胞可以被诱导向脂肪细胞、软骨样细胞、骨细胞分化;在裸鼠模型中,肌腱干细胞还可以形成肌腱样组织,软骨样组织以及腱-骨连接样组织等。相比骨髓间充质干细胞而言,TSCs具有更好的克隆形成能力和增殖能力,软骨相关基因和肌腱相关基因表达更高,具有更好的成骨、成脂和成软骨能力,因此可以作为组织工程中的种子细胞。
产品属性
产品名称 兔肌腱干细胞
简称 TSPCs
组织来源 肌腱组织
默认种属 新西兰大白兔,其他咨询
产品规格 5×10^5Cells/T25
培养基: 兔肌腱干细胞完全培养基(含FBS、生长添加剂、Penicillin、Streptomycin等)
换液频率: 每2-3天换液一次
生长特性: 贴壁
细胞形态: 成纤维细胞样
传代比例: 1:2
传代特性: 可传5代左右;3代以内状态最佳
消化液: 0.25%胰蛋白酶
兔肌腱干细胞体外培养周期有限;建议使用配套的专用生长培养基及正确的操作方法来培养,以此保证该细胞的最佳培养状态。
质量检测
实验室分离的兔肌腱干细胞经CD44免疫荧光鉴定,纯度可达90%以上,且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。
方法简介
实验室分离的兔肌腱干细胞采用胶原酶、中性蛋白酶混合消化法并通过肌腱干细胞专用培养基培养筛选制备而来,细胞总量约为5×10⁵ cells/瓶。
操作步骤
细胞复苏解冻:取出冻存的兔肌腱干细胞冻存管,37℃水浴快速融解,残留少量冰晶即可,酒精擦拭管壁,超净台中将细胞悬液转移至含预热完全培养基的 15mL 离心管。
离心去除冷冻保护剂:离心机配平,1000rpm 离心 5min,小心吸取丢弃上清液,干细胞沉淀较为松散,吸液枪头远离管底沉淀,避免吸走细胞。
轻柔重悬干细胞沉淀:加入 3mL 兔肌腱干细胞专用完全培养基,缓慢吹打沉淀 10 次左右,充分打散细胞团块,禁止大力吹打,干细胞对机械损伤敏感度高。
计数接种铺瓶:完成细胞计数,接种密度设置 4×10⁴‑8×10⁴cells/cm²,添加足量干细胞完全培养基,十字晃动培养瓶,使细胞均匀分布,不要旋转摇晃。
培养箱静置孵育:放入 37℃、5% CO₂饱和湿度培养箱静置,前 24h 严禁挪动培养瓶,保障干细胞稳定贴壁,维持干细胞干性状态。
换液及状态监控:复苏 24h 后镜检贴壁情况,弃旧培养基,更换新鲜完全培养基,去除悬浮凋亡细胞,每 2‑3 天换液,密切观察细胞有无分化形态出现。
传代扩增保干性:细胞汇合 70%‑80% 即可传代,不可长到过满,PBS 清洗,低浓度胰酶短暂消化,镜下细胞变圆马上终止消化,收集细胞悬液离心,按比例分瓶扩增,避免过度传代引发干细胞分化。
