猪成骨细胞分离自颅骨组织；颅骨位于脊柱上方，由23块形状和大小不同的扁骨和不规则骨组成。除下颌骨及舌骨外，其余各骨彼此借缝或软骨牢固连结，起着保护和支持脑、感觉器官以及消化器和呼吸器的起始部分的作用。颅分脑颅和面颅两部分。脑颅位于颅的后上部，内有颅腔，容纳脑，共8块。面颅为颅的前下部分，包含眶、鼻腔、口腔等结构，构成面部的支架，共15块。成骨细胞是骨形成的主要功能细胞，负责骨基质的合成、分泌和矿化。骨不断地进行着重建，骨重建过程包括破骨细胞贴附在旧骨区域，分泌酸性物质溶解矿物质，分泌蛋白酶消化骨基质，形成骨吸收陷窝；其后，成骨细胞移行至被吸收部位，分泌骨基质，骨基质矿化而形成新骨；破骨与成骨过程的平衡是维持正常骨量的关键。成骨细胞培养不仅有助于了解骨形成机制、骨骼系统疾病的分子和细胞学基础，也是药物筛选、生物材料开发和生物工程研究的重要手段。
产品属性
产品名称 猪成骨细胞
组织来源 颅骨组织
默认种属 中华田园犬，其他咨询
产品规格 5×10^5Cells/T25
培养基： 猪成骨细胞完全培养基(含FBS、生长添加剂、Penicillin、Streptomycin等)
换液频率： 每2-3天换液一次
生长特性： 贴壁
细胞形态： 梭形、多角形
传代比例： 1:2
传代特性： 可传3代左右
消化液： 0.25%胰蛋白酶
猪成骨细胞体外培养周期有限；建议使用配套的专用生长培养基及正确的操作方法来培养，以此保证该细胞的最佳培养状态。
质量检测
实验室分离的猪成骨细胞经ALP染色检测，纯度可达90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。
方法简介
实验室分离的猪成骨细胞采用先用胰蛋白酶短时间消化、后用胶原酶反复消化制备而来，细胞总量约为5×10⁵ cells/瓶。
操作步骤
复苏前期试剂耗材准备：37℃水浴预热猪成骨细胞专用完全培养基，准备无菌离心管、T25 培养瓶、PBS 缓冲液、胰酶‑EDTA 消化液，超净台紫外灭菌 30min，核对冻存管标签；猪原代细胞对污染敏感，检查试剂无沉淀浑浊，确认培养箱 37℃、5% CO₂参数正常。
冻存细胞水浴解冻操作：从液氮罐取出冻存管，快速放入 37℃水浴，持续轻柔晃动冻存管，1‑2min 完成冻存液融化，仅剩微小冰晶，取出冻存管，75% 酒精擦拭外壁，移入超净工作台，缩短室温暴露时间。
稀释离心去除 DMSO 冻存保护剂：将管内细胞悬液缓慢滴加到装有预温完全培养基的 15mL 离心管，轻柔吹打混匀，900r/min 离心 6min，离心结束，小心弃去上层上清，充分去除 DMSO，保护底部细胞沉淀。
重悬单细胞悬液接种铺瓶：加入猪成骨细胞完全培养基，温和吹打细胞沉淀，制备均匀单细胞悬液，细胞计数后按照标准密度接种 T25 培养瓶，十字摇晃培养瓶，使细胞均匀分布瓶底。
培养箱静置孵育贴壁：平稳放入 37℃、5% CO₂饱和湿度培养箱静置孵育，24‑48h 内减少挪动培养瓶，成骨细胞需要充足时间完成贴壁伸展。
换液处理以及细胞观察：复苏 48h 后进行首次换液，吸弃旧培养基，清除悬浮死亡细胞，加入预热新鲜培养基；每 2‑3 天更换培养基，显微镜观察多边形、梭形成骨细胞形态，后期可观察钙结节形成，监控污染情况。
传代消化收集细胞：细胞汇合 70‑80% 开展传代，弃旧培养基，PBS 洗涤细胞，加入胰酶消化，镜下细胞收缩变圆，立刻加入完全培养基终止消化，收集细胞悬液离心，重悬分瓶扩增；原代猪成骨细胞传代次数有限，高代细胞成骨能力下降。
