人尿道上皮细胞分离自尿道管组织;尿道是从膀胱通向体外的管道。尿道上皮细胞主要功能:①尿道上皮细胞排列在膀胱表面,它是由高可塑性和具有多种功能特殊类型的细胞组成;②上皮细胞组成膀胱的防御系统与病原体接触,它们具有多种防御机制来阻止病原体粘着,保持泌尿器溶解物的不渗透性;③膀胱上皮细胞表达雌激素α、β受体,上皮生长因子受体和纤维母细胞生长因子受体,在损伤和感染时,这些受体对膀胱上皮细胞起着重要作用;④能释放许多细胞因子、免疫系统介质。
产品属性
产品名称 人尿道上皮细胞
组织来源 尿道组织
默认种属 人,其他咨询
产品规格 5×10^5Cells/T25
包被条件: 鼠尾胶原Ⅰ(2-5 μg/cm²)
培养基: 人尿道上皮细胞完全培养基(含FBS、生长添加剂、Penicillin、Streptomycin等)
换液频率: 每2-3天换液一次
生长特性: 贴壁
细胞形态: 上皮细胞样
传代比例: 1:2
传代特性: 可传2-3代
消化液: 0.25%胰蛋白酶
人尿道上皮细胞体外培养周期有限;建议使用配套的专用生长培养基及正确的操作方法来培养,以此保证该细胞的最佳培养状态。
质量检测
实验室分离的人尿道上皮细胞经PCK免疫荧光鉴定,纯度可达90%以上,且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。
方法简介
实验室分离的人尿道上皮细胞采用胰蛋白酶-胶原酶混合消化法结合差速贴壁法,并通过上皮细胞专用培养基培养筛选制备而来,细胞总量约为5×10⁵ cells/瓶。
操作步骤
无菌样本预处理:原代尿道上皮细胞样本取出后,立即用含1%双抗的无菌PBS反复冲洗3次,彻底去除尿液残留、黏膜杂质及细菌污染,全程冰上操作维持细胞活性。
组织分离剪碎:冲洗干净的尿道组织,无菌操作下剔除结缔组织,剪成1mm³细小组织块,避免拉扯损伤上皮细胞,保留完整上皮组织结构。
贴壁原代培养:将组织块均匀铺于培养瓶底面,间距0.5cm,倒置培养瓶放入培养箱静置2h,待组织块贴牢后,缓慢加入尿道上皮专用完全培养基,正置培养。
低频次换液:原代培养前72h绝对不换液,防止扰动新生贴壁细胞,72h后首次轻柔换液,后续每3天换液一次,低速避光培养。
差异化消化传代:细胞爬出融合至80%传代,使用0.125%低浓度胰酶消化,37℃消化3min,仅消化上皮细胞,残留组织块及时剔除,保证细胞均一性。
细胞纯度筛选:传代后利用差速贴壁法去除成纤维杂细胞,静置30min后吸取上层细胞悬液转接新培养瓶,提升尿道上皮细胞纯度。
活性保存处理:纯化后的高活性细胞,用无血清上皮细胞冻存液重悬,密度1×10⁶个/管,梯度降温冻存,避免血清残留影响细胞后续分化活性。
