人结肠黏膜上皮细胞分离自结肠组织；结肠在右髂窝内续于盲肠，在第3骶椎平面连接直肠。结肠分升结肠、横结肠、降结肠和乙状结肠4部分，大部分固定于腹后壁，结肠的排列酷似英文字母“M”，将小肠包围在内。结肠横切面由内到外依次为：黏膜（上皮层、固有层、黏膜肌层），黏膜下层（疏松结缔组织），肌层（内环形、外纵行两层平滑肌），外膜（纤维膜或浆膜）。肠黏膜上皮细胞是机体内外环境的重要屏障，持续暴露于大量抗原中，也是机体面对病原微生物的第一道防线。因此，肠黏膜上皮细胞除有吸收、分泌和转运等重要生理功能之外，在黏膜先天性和获得性免疫防御机制中也起着重要作用。肠黏膜上皮细胞作为首先接触抗原的细胞，在黏膜免疫反应的起始阶段发挥关键作用，它决定黏膜免疫反应的发生、性质和强度。探讨正常结肠黏膜上皮细胞的分离、体外培养方法，为研究肠黏膜上皮细胞以及与肠黏膜相关疾病建立合适的细胞模型。
产品属性
产品名称 人结肠黏膜上皮细胞
组织来源 结肠组织
默认种属 人，其他咨询
产品规格 5×10^5Cells/T25
包被条件： 鼠尾胶原Ⅰ（2-5 μg/cm²）
培养基： 人结肠黏膜上皮细胞完全培养基(含FBS、生长添加剂、Penicillin、Streptomycin等)
换液频率： 每2-3天换液一次
生长特性： 贴壁
细胞形态： 上皮细胞样
传代比例： 1:2
传代特性： 可传2-3代
消化液： 0.25%胰蛋白酶
人结肠黏膜上皮细胞体外培养周期有限；建议使用配套的专用生长培养基及正确的操作方法来培养，以此保证该细胞的最佳培养状态。
质量检测
实验室分离的人结肠黏膜上皮细胞经Cytokeratin-18免疫荧光鉴定，纯度可达90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。
方法简介
实验室分离的人结肠黏膜上皮细胞采用先机械分离法、后胶原酶消化法并通过上皮细胞专用培养基培养筛选制备而来，细胞总量约为5×10⁵ cells/瓶。
操作步骤
细胞复苏：结肠黏膜上皮细胞为脆弱原代细胞，复苏温和低损。37℃慢速解冻，消毒后移入黏膜上皮专用低血清培养基，1000rpm离心5min，轻柔重悬，接种后静置36h，等待细胞稳定贴壁伸展。
细胞换液：复苏36h首次换液，后续每72h换液一次。PBS温和润洗去除肠道代谢杂质残留，更换新鲜培养基，维持黏膜上皮细胞极性形态，防止细胞去分化。
细胞传代：细胞融合度90%传代，黏膜上皮细胞连接致密。低浓度胰酶消化5min，充分解离细胞连接，终止消化后离心重悬，按1:2低比例传代，保证细胞极性稳定、形态规整。
细胞消化：针对性解离上皮细胞紧密连接，消化时间精准5min，轻敲瓶壁辅助脱落，轻柔吹打，保留细胞完整极性结构，无破损、无团块。
细胞冻存：选取形态规整、极性完好的黏膜上皮细胞，冻存液90%FBS+10%DMSO，高密度保护原代细胞活性。细胞密度7×10⁵个/mL，梯度降温液氮保存。
细胞接种：接种密度8×10³个/cm²，适配黏膜上皮细胞密集生长特性，接种后静置8h贴壁，保证细胞单层极性生长。
细胞质控：合格细胞呈规则多边形、排列整齐、极性稳定，无梭形变异、无老化空泡，无菌无污染。细胞屏障功能稳定，适用于肠道黏膜损伤、炎症、肠道屏障机制研究。
