人角膜上皮细胞分离自眼角膜组织；角膜位于眼球前壁的一层透明膜，约占纤维膜的前1/6，从后面看角膜呈正圆形，从前面看为横椭圆形。角膜厚度各部分不尽相同，中央部最薄。角膜有十分敏感的神经末梢，如有外物接触角膜，眼睑便会不由自主地合上以保护眼睛。为了保持透明，角膜并没有血管，透过外界空气、泪液及房水获取养份及氧气。角膜分为五层，由前向后依次为：上皮细胞层、前弹力层、基质层、后弹力层、内皮细胞层。其主要功能如下：①角膜是唯一的无血管的组织，具有透明的特性和合成许多蛋白的功能，分三层细胞层，外层即是上皮细胞；②角膜上皮细胞能参与先天性免疫，能感应病原体存在并发出信号从而激活角膜防御系统；③角膜上皮细胞能高效表达醛脱氢酶。角膜上皮细胞的体外培养对研究角膜的生理学、病理学、免疫学以及分子生物学都是极为重要的手段，常用于研究细胞代谢产物、病毒感染、各种生长因子和药物对细胞生长的影响。
产品属性
产品名称 人角膜上皮细胞
简称 CECs
组织来源 眼角膜组织
默认种属 人，其他咨询
产品规格 5×10^5Cells/T25
包被条件： 鼠尾胶原Ⅰ（2-5 μg/cm²）
培养基： 人角膜上皮细胞完全培养基(含FBS、生长添加剂、Penicillin、Streptomycin等)
换液频率： 每2-3天换液一次
生长特性： 贴壁
细胞形态： 上皮细胞样
传代比例： 1:2
传代特性： 可传2-3代
消化液： 0.25%胰蛋白酶
人角膜上皮细胞体外培养周期有限；建议使用配套的专用生长培养基及正确的操作方法来培养，以此保证该细胞的最佳培养状态。
质量检测
实验室分离的人角膜上皮细胞经PCK免疫荧光鉴定，纯度可达90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。
方法简介
实验室分离的人角膜上皮细胞采用混合胶原酶消化结合上皮细胞专用培养基培养筛选制备而来，细胞总量约为5×10⁵ cells/瓶。
操作步骤
细胞复苏：角膜上皮细胞增殖活性中等，复苏采用常规温和流程。37℃水浴快速解冻冻存管，酒精消毒管壁，细胞悬液移入上皮专用无血清培养基，1000rpm离心4min，弃上清重悬，接种后置于37℃、5%CO₂培养箱静置24h。
细胞换液：复苏后24h首次换液，去除复苏死细胞，后续每48h换液一次。换液时PBS轻柔润洗，清除代谢废物，更换新鲜无血清培养基，维持上皮细胞特异性形态，抑制成纤维细胞杂化生长。
细胞传代：细胞融合度达85%传代，上皮细胞接触抑制明显。弃液润洗后，加入专用上皮消化液，37℃消化2min，细胞变圆脱壁后终止消化。离心重悬，按1:2比例传代，保证细胞均匀增殖、形态规整。
细胞消化：适配上皮细胞紧密连接特性，恒温消化2min，充分解离细胞间连接。吹打均匀分散细胞，避免细胞团块形成，保证传代后细胞单层生长，无堆叠、无杂化。
细胞冻存：选取鹅卵石样规整上皮细胞，冻存液配比85%无血清培养基+10%FBS+5%DMSO。细胞密度8×10⁵个/mL，常规梯度降温，液氮保存，稳定保留细胞上皮特性。
细胞接种：常规实验接种密度7×10³个/cm²，均匀铺板，静置6h贴壁。贴壁后观察细胞伸展状态，确保单层平铺生长，形态均一。
细胞质控：正常角膜上皮细胞排列紧密、多边形规整、折光性一致，无梭形纤维化变异，无杂细胞污染。增殖稳定、凋亡率低，无菌支原体污染，适用于角膜上皮损伤、炎症、屏障功能研究。
