人角膜内皮细胞分离自眼角膜组织；角膜位于眼球前壁的一层透明膜，约占纤维膜的前1/6，从后面看角膜呈正圆形，从前面看为横椭圆形。角膜厚度各部分不尽相同，中央部最薄。角膜有十分敏感的神经末梢，如有外物接触角膜，眼睑便会不由自主地合上以保护眼睛。为了保持透明，角膜并没有血管，透过外界空气、泪液及房水获取养份及氧气。角膜分为五层，由前向后依次为：上皮细胞层、前弹力层、基质层、后弹力层、内皮细胞层。角膜的高度透明性和光学性是正常发挥生理功能的必要条件之一，而角膜内皮细胞（CEC）在维持角膜的正常生理功能方面起重要作用。角膜内皮细胞是角膜内层的单层细胞，构成了后弹力层和房水之间的物理屏障，通过离子“泵”功能调节角膜中离子浓度和水分，维持角膜的半脱水状态，保证角膜的正常厚度和透明度。一旦角膜内皮细胞功能出现紊乱，常导致角膜水肿而使角膜部分甚至完全失去透明性。角膜内皮细胞主要功能有：①角膜是唯一的无血管的组织，具有透明的特性和合成许多蛋白的功能；②角膜内皮细胞对角膜透明性有重要作用；③角膜内皮细胞通过Na⁺-K⁺-ATP酶活性，维持角膜和房水内Na⁺梯度，防止水分渗入角膜内，维持角膜实质层相对脱水状态，维持透明性。
产品属性
产品名称 人角膜内皮细胞
简称 CECs
组织来源 眼角膜组织
默认种属 人，其他咨询
产品规格 5×10^5Cells/T25
包被条件： PLL（0.1 mg/mL）或明胶（0.1%）
培养基： 人角膜内皮细胞完全培养基(含FBS、生长添加剂、Penicillin、Streptomycin等)
换液频率： 每2-3天换液一次
生长特性： 贴壁
细胞形态： 内皮细胞样
传代比例： 1:2
传代特性： 可传2-3代
消化液： 0.25%胰蛋白酶
人角膜内皮细胞体外培养周期有限；建议使用配套的专用生长培养基及正确的操作方法来培养，以此保证该细胞的最佳培养状态。
质量检测
实验室分离的人角膜内皮细胞经NSE（神经元特异性烯醇化酶）免疫荧光鉴定，纯度可达90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。
方法简介
实验室分离的人角膜内皮细胞采用混合胶原酶消化结合内皮细胞专用培养基培养筛选制备而来，细胞总量约为5×10⁵ cells/瓶。
操作步骤
细胞复苏：角膜内皮细胞属于终末分化细胞，增殖能力极弱，复苏全程零损伤操作。37℃水浴快速轻柔解冻，消毒管壁后，缓慢将细胞悬液滴入预热内皮细胞专用高营养培养基，1000rpm低速离心5min，弃上清，极轻柔重悬，避免机械损伤，接种后静置72h不移动。
细胞换液：复苏后72h首次换液，给足细胞贴壁适应时间。后续每96h换液一次，换液时PBS低温轻柔点洗，去除少量漂浮杂质，加入新鲜高营养培养基，维持细胞存活状态，延缓细胞凋亡老化。
细胞传代：仅细胞满壁100%融合后可谨慎传代，内皮细胞增殖能力有限，传代次数严格控制在3代内。弃培养基，PBS润洗2次，低浓度胰酶消化3min，轻柔脱壁后终止消化，按1:5极低比例传代，保证细胞密度满足存活需求。
细胞消化：消化操作极致轻柔，严格控制消化温度与时间，避免损伤终末分化细胞。消化后仅轻敲瓶壁辅助脱落，禁止强力吹打，最大限度保留细胞活性与完整形态，减少细胞凋亡损耗。
细胞冻存：仅选取形态完美、无老化的初代内皮细胞冻存，冻存液采用95%FBS+5%DMSO超高保护体系。细胞密度6×10⁵个/mL，慢速梯度降温，液氮避光密封保存，减少细胞活性流失。
细胞接种：高密度接种保障存活，接种密度2×10⁴个/cm²，内皮细胞依赖高密度细胞间信号维持存活。接种后缓慢摇匀，静置12h待完全贴壁，全程杜绝震荡、挪动。
细胞质控：合格角膜内皮细胞呈多边形鹅卵石形态、排列致密规整、边界清晰，无梭形变异型。细胞无自发凋亡、无空泡老化，无菌无污染，形态功能稳定，适用于角膜内皮病变、屏障功能研究。
