人角膜基质细胞分离自眼角膜组织；角膜位于眼球前壁的一层透明膜，约占纤维膜的前1/6，从后面看角膜呈正圆形，从前面看为横椭圆形。角膜厚度各部分不尽相同，中央部最薄。角膜有十分敏感的神经末梢，如有外物接触角膜，眼睑便会不由自主地合上以保护眼睛。为了保持透明，角膜并没有血管，透过外界空气、泪液及房水获取养份及氧气。角膜分为五层，由前向后依次为：上皮细胞层、前弹力层、基质层、后弹力层、内皮细胞层。角膜基质层是角膜的主要组成部分，占据角膜厚度的90%，由角膜基质细胞、胶原纤维和细胞外基质构成。角膜基质层缺损的修复主要由角膜基质细胞的增殖及分泌细胞外基质完成。角膜基质层具有结构规整，透明度高的特点，正常情况下角膜基质细胞分泌组成基质层的成分，维持角膜的透明度，此细胞对于角膜损伤的修复具有重要意义。角膜基质细胞，存在于角膜基质层中，在正常情况下，处于静止状态。但当角膜损伤时，不同上皮来源的因子及环境信号，将影响角膜基质细胞的应答反应，决定着角膜能否完全被修复。
产品属性
产品名称 人角膜基质细胞
组织来源 眼角膜组织
默认种属 人，其他咨询
产品规格 5×10^5Cells/T25
培养基： 人角膜基质细胞完全培养基(含FBS、生长添加剂、Penicillin、Streptomycin等)
换液频率： 每2-3天换液一次
生长特性： 贴壁
细胞形态： 成纤维细胞样
传代比例： 1:2
传代特性： 可传5代左右；3代以内状态最佳
消化液： 0.25%胰蛋白酶
人角膜基质细胞体外培养周期有限；建议使用配套的专用生长培养基及正确的操作方法来培养，以此保证该细胞的最佳培养状态。
质量检测
实验室分离的人角膜基质细胞经Vimentin免疫荧光鉴定，纯度可达90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。
方法简介
实验室分离的人角膜基质细胞采用混合胶原酶消化法制备而来，细胞总量约为5×10⁵ cells/瓶。
操作步骤
细胞复苏：角膜基质细胞特异性高、耐受性差，复苏采用精准温控操作。37℃水浴精准解冻60s，完全融化后立即取出消毒，细胞悬液移入专用基质细胞培养基，950rpm离心5min，弃上清，温和重悬，接种后密封培养箱静置24h，杜绝频繁开盖干扰。
细胞换液：复苏后36h首次半量换液，保留基质细胞特异性生长因子。后续每48h全量换液，无需PBS润洗，直接置换新鲜培养基，避免冲刷损伤细胞外基质结构，维持细胞特异性形态与功能。
细胞传代：细胞融合度达90%时传代，基质细胞生长致密、连接紧密。弃旧液，PBS轻柔润洗，加入专用基质细胞消化液，37℃消化5min，细胞脱壁后快速终止消化。离心重悬，按1:5比例传代，保证细胞基质微环境稳定。
细胞消化：针对性消化细胞间基质连接，消化时间精准控制5min，既保证细胞完全分离，又避免过度消化损伤细胞表面受体。消化后轻柔吹打，保留细胞完整结构，无破碎、无凋亡细胞产生。
细胞冻存：选取形态均一、基质分泌功能正常的细胞，冻存液配比88%专用培养基+10%FBS+2%DMSO，低DMSO浓度减少细胞毒性。细胞密度9×10⁵个/mL，梯度降温后液氮保存，保留细胞基质分泌功能。
细胞接种：接种密度6×10³个/cm²，均匀铺种于培养器皿，适配基质细胞致密生长特性。接种后静置6h贴壁，贴壁后观察细胞伸展状态，确保细胞平铺生长、无聚集堆叠。
细胞质控：正常角膜基质细胞呈均一梭形、胞质通透、无异常空泡，基质分泌功能稳定，无上皮细胞、杂细胞污染。细胞增殖稳定、无老化变异，无菌无污染，可用于角膜基质损伤、修复机制研究。
