人角膜成纤维细胞分离自眼角膜组织；角膜位于眼球前壁的一层透明膜，约占纤维膜的前1/6，从后面看角膜呈正圆形，从前面看为横椭圆形。角膜厚度各部分不尽相同，中央部最薄。角膜有十分敏感的神经末梢，如有外物接触角膜，眼睑便会不由自主地合上以保护眼睛。为了保持透明，角膜并没有血管，透过外界空气、泪液及房水获取养份及氧气。角膜分为五层，由前向后依次为：上皮细胞层、前弹力层、基质层、后弹力层、内皮细胞层。成纤维细胞（Fibroblast）是疏松结缔组织的主要细胞成分，由胚胎时期的间充质细胞分化而来。成纤维细胞较大，轮廓清楚，多为突起的纺锤形或星形的扁平状结构，其细胞核呈规则的卵圆形，核仁大而明显。成纤维细胞功能活动旺盛，细胞质嗜弱碱性，具明显的蛋白质合成和分泌活动，在一定条件下，它可以实现跟纤维细胞的互相转化；成纤维细胞对不同程度的细胞变性、坏死和组织缺损的修复有着十分重要的作用。刚分离的角膜成纤维细胞呈圆形、折光性良好，悬浮于培养基中。30 min细胞贴壁，其中部分开始伸出伪足，表现为小的突起；6 h后细胞基本贴壁完全，伸展成梭形，胞核清晰，分布较均匀，散在生长，不聚集成团；细胞生长迅速，5-7天即呈融合状态，细胞排列紧密，有的交叉重叠生长，平坦、胞体较大，细胞质透明，细胞核较大，呈椭圆形，颜色淡。细胞融合，并彼此连接成网状；细胞呈突起的纺锤形或星形的扁平分布。角膜成纤维细胞在生理条件下的主要功能包括：构造和维持角膜的正常形态，合成和释放细胞外基质以及组织损伤后及时大量聚集修复损伤组织。
产品属性
产品名称 人角膜成纤维细胞
组织来源 眼角膜组织
默认种属 人，其他咨询
产品规格 5×10^5Cells/T25
培养基： 人角膜成纤维细胞完全培养基(含FBS、生长添加剂、Penicillin、Streptomycin等)
换液频率： 每2-3天换液一次
生长特性： 贴壁
细胞形态： 成纤维细胞样
传代比例： 1:2
传代特性： 可传5代左右；3代以内状态最佳
消化液： 0.25%胰蛋白酶
人角膜成纤维细胞体外培养周期有限；建议使用配套的专用生长培养基及正确的操作方法来培养，以此保证该细胞的最佳培养状态。
质量检测
实验室分离的人角膜成纤维细胞经Vimentin免疫荧光鉴定，纯度可达90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。
方法简介
实验室分离的人角膜成纤维细胞采用胰蛋白酶-胶原酶混合消化法结合差速贴壁法制备而来，细胞总量约为5×10⁵ cells/瓶。
操作步骤
细胞复苏：角膜成纤维细胞属于脆弱原代细胞，复苏全程无菌低温操作。37℃水浴慢速解冻，彻底融化无冰晶残留，管壁酒精消毒后，将细胞悬液移入含角膜细胞专用培养基的离心管，1000rpm离心5min，弃上清，轻柔重悬，接种后静置48h首次观察，减少外界干扰。
细胞换液：复苏后48h首次换液，后续每72h换液一次。换液时PBS低温轻柔润洗1次，去除漂浮死细胞，加入预热恒温培养基，避免温差刺激导致细胞应激老化。全程动作轻柔，防止贴壁脆弱细胞脱落。
细胞传代：细胞融合度达95%满壁后传代，成纤维细胞接触抑制显著。弃培养基，PBS润洗2次，加入0.2%低浓度胰酶消化液，37℃消化3min，待细胞完全舒展脱壁后终止消化。离心重悬，按1:2低比例传代，保证细胞生长密度，延缓细胞老化。
细胞消化：采用低浓度温和消化体系，适配角膜细胞脆弱特性。消化前彻底清除血清残留，恒温充分消化3min，轻敲瓶壁辅助脱落。吹打力度均匀缓慢，将梭形细胞充分分散，无团块、无破损，最大程度保留细胞活性。
细胞冻存：选取形态细长、排列规整、无老化空泡的健康细胞，冻存液配比90%FBS+10%DMSO，无基础培养基添加。细胞密度调整至7×10⁵个/mL，梯度缓慢降温，液氮长期保存，有效延缓原代细胞衰老。
细胞接种：原代角膜成纤维细胞生长依赖性强，接种密度控制在9×10³个/cm²，密度过低易生长停滞。接种后缓慢摇匀，静置8h待完全贴壁，贴壁期间杜绝移动、震荡培养容器。
细胞质控：合格细胞呈细长梭形、排列整齐、折光性强，无宽大扁平老化形态，无杂质污染。细胞增殖缓慢、形态稳定，传代5代内无明显衰老，支原体、真菌、细菌检测阴性，适用于角膜损伤修复、纤维化研究。
