人甲状腺滤泡上皮细胞分离自甲状腺组织;甲状腺是脊椎动物非常重要的腺体,属于内分泌器官。在哺乳动物身体中,它位于颈部甲状软骨下方,气管两旁。甲状腺表面有结缔组织被膜,表面结缔组织深入到腺实质,将实质分为许多不明显的小叶,小叶内有很多甲状腺滤泡和滤泡旁细胞。甲状腺控制使用能量的速度、制造蛋白质、调节机体对其他贺尔蒙的敏感性。甲状腺依靠制造甲状腺素来调整这些反应,有T3和T4。这两者调控代谢、生长速率还有调解其他的身体系统。T3和T4由碘和酪胺酸合成。甲状腺也生产降钙素,调节体内钙的平衡。其中,甲状腺滤泡上皮细胞(也称为滤泡细胞或主要细胞)是在甲状腺细胞是负责生产和分泌甲状腺激素,甲状腺素(T4)和三碘甲状腺原氨酸(T3)。
产品属性
产品名称 人甲状腺滤泡上皮细胞
组织来源 甲状腺组织
默认种属 人,其他咨询
产品规格 5×10^5Cells/T25
包被条件: 鼠尾胶原Ⅰ(2-5 μg/cm²)
培养基: 人甲状腺滤泡上皮细胞完全培养基(含FBS、生长添加剂、Penicillin、Streptomycin等)
换液频率: 每2-3天换液一次
生长特性: 贴壁
细胞形态: 上皮细胞样
传代比例: 1:2
传代特性: 可传2-3代
消化液: 0.25%胰蛋白酶
人甲状腺滤泡上皮细胞体外培养周期有限;建议使用配套的专用生长培养基及正确的操作方法来培养,以此保证该细胞的最佳培养状态。
质量检测
实验室分离的人甲状腺滤泡上皮细胞经TG(甲状腺球蛋白)免疫荧光鉴定,纯度可达90%以上,且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。
方法简介
实验室分离的人甲状腺滤泡上皮细胞采用胰蛋白酶-胶原酶混合消化法结合差速贴壁法,并通过上皮细胞专用培养基培养筛选制备而来,细胞总量约为5×10⁵ cells/瓶。
操作步骤
细胞复苏:上皮细胞耐受性弱,采用慢速温和复苏法。37℃水浴缓慢解冻,保留微量冰晶后取出,消毒管壁。将细胞悬液缓慢滴入4mL预热上皮细胞专用低血清培养基,轻柔混匀,1000rpm离心5min,弃上清,温和重悬细胞,避免机械损伤,接种后静置培养24h不挪动培养瓶。
细胞换液:复苏后48h首次换液,让上皮细胞充分贴壁适应环境。后续每72h换液一次,弃旧液后用无菌PBS缓慢润洗瓶壁,轻柔去除漂浮杂质,加入新鲜低血清完全培养基,维持细胞上皮形态,防止细胞去分化、纤维化转变。
细胞传代:细胞融合度达90%时传代,上皮细胞接触抑制明显。弃培养基,PBS润洗2次,加入专用上皮细胞消化液(胰酶+EDTA低浓度配比),37℃消化2-3min,待细胞完全变圆脱壁后终止消化。离心重悬,按1:2比例低比例传代,避免传代过密或过稀导致细胞生长停滞。
细胞消化:甲状腺滤泡上皮细胞连接紧密,需充分消化细胞间连接。消化前彻底去除残留血清,保证消化效率,恒温消化2-3min,期间可轻敲瓶壁辅助细胞脱落。消化后轻柔吹打,尽量保持细胞单体状态,减少细胞团块,避免影响后续增殖分化。
细胞冻存:选取形态规整、鹅卵石样的健康上皮细胞,采用高血清冻存体系(92%FBS+8%DMSO),无额外培养基添加,最大程度保护上皮细胞活性。细胞密度调整至8×10⁵个/mL,程序降温盒梯度降温,-80℃过夜后转入液氮,避免反复冻融。
细胞接种:上皮细胞依赖细胞间接触生长,接种密度不宜过低,常规按8×10³个/cm²接种。接种后缓慢十字摇匀,静置6h待完全贴壁,贴壁期间禁止移动培养板/瓶,防止细胞移位、脱落,保证细胞均匀铺展、形态规整。
细胞质控:合格细胞呈典型鹅卵石样上皮形态,排列紧密、边界清晰、折光性一致,无梭形纤维化变异。细胞生长缓慢、形态稳定,无自发凋亡,无菌无支原体污染,无去分化现象,可用于甲状腺生理功能、炎症机制研究。
