人滑膜细胞分离自膝关节滑膜组织；滑膜组织是位于关节腔内面的内衬结构，各种关节内疾病均会累及滑膜。而滑膜细胞是维持关节正常功能的重要组织结构，同时在各种关节疾患中也是主要病变部位。骨关节炎（OA）以关节软骨退行性变为特征，其病理改变累及关节的各个组成部分，但绝不仅局限于软骨，还包括软骨下骨、滑膜、半月板和韧带。各组成部分的病理改变相互影响，相互作用，共同加速关节的退变。滑膜细胞是构成滑膜层的最大细胞群体，是维持关节正常功能的重要组织结构，它包埋在颗粒状无定性的基质中，基质内有分散的纤维分布。滑膜由A型（巨噬样滑膜细胞）、B型（成纤维样滑膜细胞）以及C型（树突细胞样滑膜细胞）细胞组成。滑膜细胞主要功能：①滑膜细胞产生润滑液成分，并且与关节腔的吸收和血液/润滑液交换有关；②滑膜细胞增生，表现为不依赖于支持物生长，并且分泌大量的效应分子来促进炎症和关节损坏；③是自身自分泌和旁分泌网络中效应因子的一部分。
产品属性
产品名称 人滑膜细胞
组织来源 膝关节滑膜组织
默认种属 人，其他咨询
产品规格 5×10^5Cells/T25
培养基： 人滑膜细胞完全培养基(含FBS、生长添加剂、Penicillin、Streptomycin等)
换液频率： 每2-3天换液一次
生长特性： 贴壁
细胞形态： 成纤维细胞样
传代比例： 1:2
传代特性： 可传3-5代左右
消化液： 0.25%胰蛋白酶
人滑膜细胞体外培养周期有限；建议使用配套的专用生长培养基及正确的操作方法来培养，以此保证该细胞的最佳培养状态。
质量检测
实验室分离的人滑膜细胞经Vimentin免疫荧光鉴定，纯度可达90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。
方法简介
实验室分离的人滑膜细胞采用混合酶消化法制备而来，细胞总量约为5×10⁵ cells/瓶。
操作步骤
细胞复苏：提前预热滑膜细胞专用完全培养基与37℃恒温水浴锅，取出冻存细胞管，旋松管盖释放液氮残留后拧紧，将冻存管下半部分浸入水浴快速摇晃解冻，仅留微量冰晶时取出。酒精擦拭管壁消毒，无菌条件下将细胞悬液移入含4mL完全培养基的离心管，轻柔混匀，1000rpm离心4min，弃上清，用新鲜培养基重悬细胞，接种至T25培养瓶，置于37℃、5%CO₂培养箱静置培养。
细胞换液：复苏后静置24h首次换液，后续每48h常规换液。取出培养瓶，无菌弃去陈旧培养基，用预热无钙镁PBS轻柔润洗瓶壁1次，去除残留代谢废物与漂浮死细胞，切勿冲刷贴壁细胞。加入6mL新鲜滑膜专用完全培养基，放回培养箱恒温培养，全程严格无菌操作，避免细胞污染。
细胞传代：待细胞贴壁融合度达85%-90%时启动传代。弃培养基，PBS润洗2次，去除残留血清。加入2mL 0.25%胰酶-EDTA消化液，37℃孵育1-2min，显微镜下观察细胞大部分变圆、轻微脱壁后，立即加入等量完全培养基终止消化。轻柔吹打瓶壁收集细胞悬液，1000rpm离心4min，弃上清重悬，按1:2~1:4比例分瓶接种，补加新鲜培养基继续培养。
细胞消化：针对密集生长的滑膜成纤维样细胞，弃液后PBS充分清洗残留血清，避免抑制胰酶活性。精准加入消化液覆盖瓶底，37℃精准消化90-120s，禁止过度消化导致细胞损伤。消化结束即刻加培养基中和，采用轻柔多角度吹打方式，避免产生气泡，确保细胞单个分散，无团块残留。
细胞冻存：选取对数生长期、状态优良的细胞，常规消化离心收集细胞沉淀。提前配制滑膜细胞专用冻存液（90%胎牛血清+10%DMSO），预冷备用。用冻存液轻柔重悬细胞，调整细胞密度至1×10⁶个/mL，分装至无菌冻存管并标注细胞名称、日期、批次。放入程序降温盒，-80℃冰箱梯度降温24h后，转入液氮罐长期保存。
细胞接种：消化离心后计数细胞，根据实验需求调整接种密度，常规增殖实验按5×10³个/cm²接种。将细胞悬液轻柔滴加至培养瓶/板，轻轻十字摇晃混匀，避免细胞聚集堆积。放入培养箱静置4-6h，待细胞完全贴壁后，再进行后续培养与实验操作，保证细胞均匀生长。
细胞质控：每日倒置显微镜观察细胞形态，正常滑膜细胞呈梭形成纤维样、贴壁紧密、折光性均匀，无悬浮死细胞与杂菌。每周检测支原体、真菌、细菌污染，细胞传代3次内形态稳定、增殖均匀，无老化空泡，即可用于后续实验，异常细胞及时丢弃。
