小肠黏膜上皮细胞是构成小肠黏膜屏障的核心细胞，分离自十二指肠、空肠或回肠组织。小肠作为人体消化吸收的主要场所，其黏膜表面布满环形皱襞和小肠绒毛，上皮细胞紧密排列形成绒毛表层，使小肠吸收面积扩大约600倍。
产品属性 product attributes
产品名称: 小肠粘膜上皮细胞
组织来源：人/小鼠正常小肠组织
细胞形态：上皮细胞样，多角形，呈铺路石状排列
生长特性：贴壁生长，需依赖细胞外基质支撑
保存条件：冻存细胞可在-80℃保存1个月，液氮中长期保存可达数年
包被条件：鼠尾胶原Ⅰ(2-5μg/cm²)或Matrigel基质胶包被培养瓶
培养基：上皮细胞专用培养基，添加10%胎牛血清、表皮生长因子(EGF)、胰岛素、转铁蛋白等生长添加剂
培养环境：37℃、5%CO₂培养箱，湿度≥95%
换液频率：每2-3天更换一次新鲜培养基
传代比例：细胞融合度达80-90%时，按1:2至1:3比例传代
消化液：0.25%胰蛋白酶-EDTA溶液，37℃消化1-2分钟
质量检测 quality test
实验室分离的小肠粘膜上皮细胞经Cytokeratin免疫荧光鉴定，纯度可达90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。
方法简介 method
实验室分离的小肠粘膜上皮细胞采用胶原酶消化法结合差速贴壁法、并通过上皮细胞专用培养基培养筛选制备而来。
操作步骤 operation steps
准备工作：超净台紫外灭菌 30 min，取出配套小肠上皮专用完全培养基、T25 培养瓶、移液管、离心管，37℃水浴预热培养基；穿戴无菌手套口罩。
细胞解冻复苏：取出液氮中冻存的细胞管，快速放入 37 ℃水浴，不停摇晃，1‑2 min 内冻存液完全融化。
稀释去除冻存保护剂：冻存管表面 75% 酒精消毒，移入超净台；将细胞悬液缓慢滴入装有 5 mL 预热完全培养基的 15 mL 离心管内，轻轻吹打混匀。
离心收集细胞沉淀：离心管配平，1000 rpm，室温离心 5 min；离心结束小心取出，75% 酒精擦拭管壁。
重悬细胞：弃去上层上清废液，加入 2‑3 mL 新鲜预热完全培养基，轻柔吹打 10‑15 次，制成均匀单细胞悬液，避免产生气泡。
接种铺瓶：吸取全部细胞悬液转移至 T25 培养瓶，补加培养基至总体积 5 mL，轻轻十字摇晃培养瓶，使细胞均匀分布瓶底。
放入培养箱培养：瓶盖拧松半圈透气，置于 37℃、5% CO₂饱和湿度培养箱；次日镜检细胞贴壁状态，2‑3 天换液一次。
