大鼠终板软骨细胞分离自椎间盘终板软骨组织；椎体终板是椎体在生长发育过程中，椎体上下面的骨骺板骨化停止后形成骨板，呈轻度凹陷，即为骨性终板。椎体终板的中央仍为一薄层透明软骨覆盖，并终生存在，即为软骨终板，上下软骨终板与髓核和纤维环连接共同构成椎间盘。椎体终板构成了椎间盘的上下边界，位于椎体中心的松质骨和椎间盘之间。是由软骨下骨和厚度相当的覆盖其上的软骨组成。主要作用是防止椎间盘髓核组织嵌入椎体，同时具有平衡分散应力的作用。成熟的终板软骨细胞多2-8个成群分布于软骨陷窝内，这些终板软骨细胞由同一个母细胞分裂增殖而成，称为同源细胞群。电镜下，终板软骨细胞有突起和皱褶，细胞质内有大量的粗面内质网和发达的高尔基复合体及少量的线粒体。在组织切片中，终板软骨细胞收缩为不规则形，在软骨囊和细胞之间出现较大的腔隙。
软骨细胞在单层（2D）培养中的体外扩增必然会导致其去分化。软骨细胞会逆转为分化程度较低的细胞类型，原本合成的透明软骨相关蛋白——II型胶原蛋白（COL2）和聚集蛋白聚糖（ACAN），分别被 I 型胶原蛋白（COL1）和多功能蛋白聚糖（VCAN）取代。这些细胞外基质成分是纤维软骨的典型特征，细胞变成纤维软骨与透明软骨的混合物。有研究表明，软骨细胞特异性基因Ⅱ型胶原和蛋白聚糖在P0代细胞高表达，其表达量随传代次数增加而下降。P1、P2、P3、P4、P5代细胞Ⅱ型胶原的mRNA表达量分别为P0代细胞的87%、90%、67%、20%和3%，蛋白聚糖表达量分别是P0代细胞的60%、30%、23%、18%和10%（参考文献：《体外持续传代引起小鼠透明软骨细胞表型和细胞外基质平衡变化的研究》）；细胞形态由椭圆形、圆形、短梭形、多角形，逐步转变为可增殖的长梭形、成纤维样，表现出成纤维细胞样表型。体外培养中，通过水凝胶包封或破坏F-肌动蛋白细胞骨架等方式恢复细胞的圆形三维形态，可在一定程度上恢复软骨细胞表型，3D培养球形细胞形态似乎是软骨细胞表型不可或缺的特征。体外培养的软骨细胞对于研究其生理功能、药物作用以及各种致病因素作用下的病理生理改变具重要意义。
产品属性
产品名称 大鼠终板软骨细胞
组织来源 椎间盘组织
默认种属 SD大鼠，其他咨询
产品规格 5×10^5Cells/T25 / 5×10^5Cells/Vial
培养基： 大鼠终板软骨细胞完全培养基(含FBS、生长添加剂、Penicillin、Streptomycin等)
换液频率： 每3-4天换液一次
生长特性： 贴壁
细胞形态： 梭形、多角形
传代比例： 1:2
传代特性： 可传5代左右；3代以内状态最佳
消化液： 0.25%胰蛋白酶
大鼠终板软骨细胞体外培养周期有限；建议使用配套的专用生长培养基及正确的操作方法来培养，以此保证该细胞的最佳培养状态。
质量检测
实验室分离的大鼠终板软骨细胞，P0代经Ⅱ型胶原蛋白免疫荧光鉴定，纯度可达90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。
方法简介
实验室分离的大鼠终板软骨细胞采用胶原酶-中性蛋白酶联合消化并结合软骨细胞专用培养基培养筛选制备而来，细胞总量约为5×10⁵ cells/瓶。
操作步骤
摘取大鼠腰椎椎体上下软骨终板，小心分离终板与椎间盘、骨组织，PBS 多次冲洗。
去除终板表面结缔组织，剪碎软骨终板至细小颗粒，先用 0.25% 胰酶预消化 20min 弃上清。
加入 0.2%Ⅱ 型胶原酶，37℃水浴持续消化 90min，间断吹打促进软骨细胞释放。
过滤消化液，1400rpm 离心 10min 收集细胞，用 DMEM 高糖完全培养基重悬。
接种细胞于培养瓶，置于 5% CO₂培养箱，培养 48h 首次换液去除未贴壁杂质。
培养期间避免细胞过度传代，防止软骨细胞发生去分化、丧失 Ⅱ 型胶原分泌能力。
通过 Ⅱ 型胶原免疫荧光染色鉴定终板软骨细胞功能状态，合格后开展后续培养。
