大鼠肾实质细胞分离自肾组织;肾脏是机体的重要器官,它的基本功能是生成尿液,借以清除体内代谢产物及某些废物、毒物,同时经重吸收功能保留水份及其他有用物质,如葡萄糖、蛋白质、氨基酸、钠离子、钾离子、碳酸氢钠等,以调节水、电解质平衡及维护酸碱平衡。肾脏同时还有内分泌功能,生成肾素、促红细胞生成素、活性维生素D3、前列腺素、激肽等,又为机体部分内分泌激素的降解场所和肾外激素的靶器官。肾脏的这些功能,保证了机体内环境的稳定,使新陈代谢得以正常进行。肾脏移植是临床上治疗慢性肾功能衰竭的有效方法,然而这种方法受到供体肾短缺的限制。肾细胞移植可部分解决供体肾短缺的问题,是未来可以替代肾脏移植的最有效方法。因此,体外肾细胞的培养受到国内外有关专家的密切关注。原代肾细胞作为一种常用的肾脏毒理学研究对象,其分离方法主要有机械研磨分离法和酶消化法,酶消化法因对细胞损伤小、分离效果好而优于机械研磨分离法;目前常用的酶消化法主要是胰蛋白酶消化法和胶原酶消化法。
产品属性
产品名称 大鼠肾实质细胞
组织来源 肾组织
默认种属 SD大鼠,其他咨询
产品规格 5×10^5Cells/T25
包被条件: 鼠尾胶原Ⅰ(2-5 μg/cm²)
培养基: 大鼠肾实质细胞完全培养基(含FBS、生长添加剂、Penicillin、Streptomycin等)
换液频率: 每2-3天换液一次
生长特性: 贴壁
细胞形态: 成纤维细胞样
传代比例: 1:2
传代特性: 可传1-2代
消化液: 0.25%胰蛋白酶
大鼠肾实质细胞体外培养周期有限;建议使用配套的专用生长培养基及正确的操作方法来培养,以此保证该细胞的最佳培养状态。
质量检测
实验室分离的大鼠肾实质细胞,不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。
方法简介
实验室分离的大鼠肾实质细胞采用胶原酶-胰蛋白酶混合消化法结合差速贴壁法制备而来,细胞总量约为5×10⁵ cells/瓶。
操作步骤
前期准备:常规无菌培养板预处理,预热肾实质细胞专用完全培养基、预冷PBS、胰酶-EDTA消化液,备好无菌过滤筛、离心管,全程低温无菌操作。
无菌取材:处死大鼠后无菌取双侧肾脏,完整剔除包膜、肾盂及血管结缔组织,保留完整肾实质整体组织,预冷PBS充分漂洗去除残留血液。
组织处理:将肾实质组织均匀剪碎至1mm³组织块,PBS反复漂洗2次,去除游离血细胞与破碎组织,保留完整活性组织块。
酶解消化:加入胰酶-EDTA混合消化液,37℃消化12–15min,期间间断晃动离心管,促进组织充分解离,避免局部消化过度。
终止过滤:血清培养基终止消化,轻柔吹打分散细胞,经70μm筛网过滤,截留未消化组织块,收集纯净细胞悬液。
离心重悬:1200rpm离心5min,弃上清,用预热完全培养基轻柔重悬细胞沉淀,制备均匀单细胞悬液。
接种培养:定量接种细胞,置于37℃、5%CO₂培养箱;24h换液去除悬浮死细胞,后续每2–3d常规半量换液,稳定细胞生长状态。
