大鼠滑膜细胞分离自膝关节滑膜组织;滑膜组织是位于关节腔内面的内衬结构,各种关节内疾病均会累及滑膜。而滑膜细胞是维持关节正常功能的重要组织结构,同时在各种关节疾患中也是主要病变部位。骨关节炎(OA)以关节软骨退行性变为特征,其病理改变累及关节的各个组成部分,但绝不仅局限于软骨,还包括软骨下骨、滑膜、半月板和韧带。各组成部分的病理改变相互影响,相互作用,共同加速关节的退变。滑膜细胞是构成滑膜层的最大细胞群体,是维持关节正常功能的重要组织结构,它包埋在颗粒状无定性的基质中,基质内有分散的纤维分布。滑膜由A型(巨噬样滑膜细胞)、B型(成纤维样滑膜细胞)以及C型(树突细胞样滑膜细胞)细胞组成。滑膜细胞主要功能:①滑膜细胞产生润滑液成分,并且与关节腔的吸收和血液/润滑液交换有关;②滑膜细胞增生,表现为不依赖于支持物生长,并且分泌大量的效应分子来促进炎症和关节损坏;③是自身自分泌和旁分泌网络中效应因子的一部分。
产品属性
产品名称 大鼠滑膜细胞
组织来源 膝关节滑膜组织
默认种属 SD大鼠,其他咨询
产品规格 5×10^5Cells/T25
培养基: 大鼠滑膜细胞完全培养基(含FBS、生长添加剂、Penicillin、Streptomycin等)
换液频率: 每2-3天换液一次
生长特性: 贴壁
细胞形态: 成纤维细胞样
传代比例: 1:2
传代特性: 可传5代左右;3代以内状态最佳
消化液: 0.25%胰蛋白酶
大鼠滑膜细胞体外培养周期有限;建议使用配套的专用生长培养基及正确的操作方法来培养,以此保证该细胞的最佳培养状态。
质量检测
实验室分离的大鼠滑膜细胞经Vimentin免疫荧光鉴定,纯度可达90%以上,且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。
方法简介
实验室分离的大鼠滑膜细胞采用混合酶消化法制备而来,细胞总量约为5×10⁵ cells/瓶。
操作步骤
一、实验前准备
显微剪镊灭菌;0.2%Ⅰ 型胶原酶、DMEM 完全培养基、预冷无菌 PBS;200 目滤网。
选用大鼠跟腱、趾屈肌腱作为取材来源,操作台提前消毒。
二、取材与预处理
处死大鼠后剥离后肢皮肤,分离跟腱,剔除肌腱外围腱鞘、肌肉、脂肪组织。
PBS 漂洗肌腱 3 次,横向剪碎肌腱至 1mm³ 组织小块。
三、细胞分离与消化
胶原酶溶液 37℃摇床消化 1.5h,间断吹打。
血清培养基终止消化,充分吹打解离细胞。
滤网过滤,收集单细胞滤液。
四、纯化与接种培养
离心弃上清,完全培养基重悬接种培养瓶。
培养箱静置培养,第 2 天换液去除未贴壁碎片。
细胞长满后传代 2 次,去除杂细胞,获得纯化肌腱成纤维细胞。
